Биологическая полноценность и клиническая эффективность криоконсервированных тромбоцитов человека

Биологическая полноценность и клиническая эффективность криоконсервированных тромбоцитов человека

 

We studied value of long-stored platelet concentrates, cryopreserved with original method. It was shown, that high-rate platelets' outcome overwhelmed 50 % of their first number after 24 months of cryopreservation; furthermore, high-rate platelets (granule-rich cells) sustained their functional activity and provided good clinic effect.

Key words: platelet concentrates, cryopreservation, platelets with granules

 

В настоящее высокий уровень хирургической активности сочетается с постоянным ростом числа трансфузий компонентов крови, в том числе, тромбоцитов [1,5]. В крупных многопрофильных клиниках (без специализированных онкологических и гематологических отделений) свыше 60 % всех трансфузий тромбоцитных концентратов (ТК) проводятся при различных хирургических операциях [1,5]. Среди методик заготовки ТК наиболее эффективной считается процедура автоматического афереза; одна стандартная доза аферезного ТК содержит 95–200*109 структурно и функционально полноценных клеток, при этом морфофункциональные характеристики тромбоцитов в аферезных ТК значимо не меняются по сравнению с исходной кровью доноров [3]. Однако уже на 3-и сутки хранения доля биологически полноценных тромбоцитов в ТК резко снижается [3], а общий срок хранения ТК, указанный регламентом, не превышает 5 суток, что исключает возможность карантизации [4]. В связи с этим в НИИ СП им. Н. В. Склифосовского нами была разработана и внедрена в производство методика длительного (до 24 мес) хранения тромбоцитов путем криоконсервирования ТК с использованием комбинированного протектора на основе 5 %-ного диметилсульфоксида с декстраном. Метод включает морфофункциональный анализ тромбоцитов и отбор ТК, наиболее пригодных для криоконсервирования; заморозку ТК с комбинированным стерильным криопротектором при -850С; хранение криоконсервированных ТК в жидком азоте при -1960С в течение 12–24 месяцев; карантинизацию ТК путем повторного обследования доноров на HIV, HCV, HBV, RW и АЛТ через 180 суток с даты заготовки ТК; разморозку ТК при 370С и повторный морфофункциональный анализ тромбоцитов ТК. Оценку качества тромбоцитов проводили с помощью оригинального морфофункционального метода, основанного на окрашивании клеток витальными флуорохромными красителями с дальнейшим анализом во флуоресцентном микроскопе [2]. Этот метод позволяет выявить структурно полноценные тромбоциты (клетки с гранулами), определить их чувствительность к различным факторам, а также исследовать функциональную активность тромбоцитов и их взаимодействие с различными адгезивными субстратами.

Рис. 1. Оценка биологических свойств криоконсервированных тромбоцитов. Витальная окраска трипафлавином-акридиновым оранжевым. Во флуоресцентном микроскопе показаны тромбоциты ТК до (а) и после (б) криоконсервирования, тромбоцитарные агрегаты после активации криоконсервированных ТК коллагеном (в), адгезия криоконсервированных тромбоцитов на поверхности дермального матрикса (г)

 

За 3 года (2013–2015 гг.) нами было заготовлено 160 криоконсервированных доз ТК, из них 70 разморожено и использовано в клинических целях. Было установлено, что в ТК, отобранных для криоконсервирования, сохранность общего числа тромбоцитов составила в среднем 89 %, сохранность биологически полноценных тромбоцитов (клетки с гранулами) — 51 %. После всех процедур криоконсервирования тромбоциты с гранулами сохраняли свою исходную структуру (рис. 1а, б), проявляли нормальную адгезивную активность на стекле и активно агрегировали под действием стандартных агонистов коллагена и АДФ (рис. 1в). Кроме того, тромбоциты с гранулами из криоконсервированных ТК сохраняли свою способность к адгезии на коллагеновых матриксах с низкой и средней степенью компактизации волокон (коллагеновые повязки и губки, дермальный матрикс, см. рис. 1г.). Эффективность криоконсервированных ТК исследовали у пациентов из разных хирургических отделений, имевших показания к трансфузии ТК (геморрагические осложнения, выраженная тромбоцитопения, очень низкое качество тромбоцитов в циркулирующей крови). К настоящему моменту на примере 10 пациентов с кардиохирургическими заболеваниями показано, что трансфузии криоконсервированных ТК не сопровождались развитием посттрансфузионных реакций или осложнений, при этом клинически у всех пациентов отмечено купирование геморрагического синдрома. В циркулирующей крови через 1 час после трансфузии общее число тромбоцитов выросло в среднем на 13,0х109/мл, через 24 часа — на 4,3х109/мл; скорректированное число прироста тромбоцитов составило соответственно 10,8 (норма ≥7) и 4,2 (норма ≥4,5).

Таким образом, в медицине и связанных с ней биологических науках достигнут существенный прогресс [6–22], данная работа также вносит существенный вклад, так как разработанная нами методика криоконсервирования является эффективной для получения тромбоцитных концентратов длительного хранения, отвечающих отечественным и зарубежным стандартам качества компонентов крови.

 

Литература:

 

1.                Вильянинов В. Н., Калеко С. П. и др. Концепция обеспечения тромбоцитными компонентами пациентов в многопрофильном лечебном учреждении // Трансфузиология. 2012. № 3. С. 40–41.
2.                Макаров М. С., Кобзева Е. Н., Высочин И. В., Боровкова Н. В., Хватов В. Б. Морфофункциональный анализ тромбоцитов человека с помощью витального окрашивания // Бюлл. Эксп. Биол. Мед. 2013. С.388–391.
3.                Макаров М. С. Кобзева Е. Н., Высочин И. В., Боровкова Н. В., Хватов В. Б. Применение витального окрашивания для морфофункционального анализа тромбоцитов человека короткого хранения // Альманах клинической медицины. 2014. № 30. С. 83–87.
4.                Руководство по приготовлению, использованию и обеспечению качества компонентов крови / Европейский комитет по переливанию крови — 16изд. — Нанси (Франция): Bialec, 2010. –490с.
5.                Чечеткин А. В., Макеев А. Б. и др. Донорство компонентов крови в российской федерации // Трансфузиология. –2013. –Т. 14, № 2. –С. 4–12.
6.                Бобров А. Е., Гегель Н. В., Гурова О. Ю., Романцова Т. И., Савельева Л. В. Особенности поведения больных с избыточной массой тела и ожирением. // Альманах клинической медицины. 2014. № 32. С. 3–7
7.                Пампутис С. Н., Александров Ю. К., Лопатникова Е. Н.Значение витамина D в диагностике и лечении гиперпаратиреоза. // Альманах клинической медицины. 2014. № 32. С.56–60
8.                Евстигнеева Л. П. Немедикаментозные методы лечения остеопороза. // Альманах клинической медицины. 2014. № 32. С.73–79
9.                Полякова Г. А. Варианты миелолипом надпочечника и редкие сочетанные заболевания. // Альманах клин. мед. 2014. № 32. С.105–111
10.            Щукина О. Б.Факторы прогноза болезни крона. // Альманах клинической медицины. 2014. № 33. С. 3–14
11.            Бакулин И. Г., Варламичева А. А. Гепаторенальный синдром: практические рекомендации по диагностике и лечению. // Альманах клинической медицины. 2014. № 33. С. 23–31
12.            Белоусова Е. А. Антибиотикассоциированная диарея и антибиотикассоциированные колиты. // Альманах клинической медицины. 2014. № 33. С. 39–46
13.            Белякова С. В., Белоусова Е. А. Приверженность к лечению больных хроническим панкреатитом в московской области. // Альманах клинической медицины. 2014. № 33. С. 64–70
14.            Волчкова Е. В., Белоусова Е. А., Макарчук П. А. и др. Частота выявления инфекции CLOSTRIDIUM DIFFICILE в больничных условиях. // Альманах клинической медицины. 2014. № 33. С. 71–76
15.            Палеев Н. Р., Палеев Ф. Н. Дмитрий Дмитриевич Плетнев (к 240-летию Екатерининской больницы, ныне МОНИКИ им. М. Ф. Владимирского) // Альманах клинической медицины. 2014. № 35. С. 6–11
16.            Палеев Ф. Н., Санина Н. П., Макарков А. И., Мылов Н. М., Островский Е. И., Хишова Н. Н., Москалец О. В., Палеев Н. Р. Иммунологическая характеристика воспалительных заболеваний миокарда вирусной этиологии // Альманах клинической медицины. 2014. № 35. С. 12–21
17.            Санина Н. П., Палеев Ф. Н., Макарков А. И., Мылов Н. М., Островский Е. И., Хишова Н. Н., Москалец О. В., Палеев Н. Р. Цитокиновый профиль TH1-, TH2- И TH17- субпопуляций лимфоцитов при вирусных миокардитах // Альманах клинической медицины. 2014. № 35. С. 22–29
18.            Терпигорев С. А., Палеев Ф. Н. Надежность оценки активности воспалительного процесса при саркоидозе легких по уровню лимфоцитов жидкости бронхоальвеолярного лаважа и неоптерина крови // Альманах клинической медицины. 2014. № 35. С. 38–41
19.            Островский Е. И., Карандашов В. И., Шатохина С. Н., Санина Н. П., Рыжкова О. Ю., Катломина Е. М., Палеев Н. Р. Влияние фотогемотерапии на клиническое течение бронхиальной астмы // Альманах клинической медицины. 2014. № 35. С. 60–65
20.            Юдин В. Н., Карпов Л. Е., Ватазин А. В., Зулькарнаев А. Б. Два подхода к программной поддержке врачебных решений. // Альманах клинической медицины. 2014. № 30. С. 88–90
21.            Прокопенко Е. И. Беременность у пациенток с трансплантированной почкой. // Альманах клинической медицины. 2014. № 30. С. 99–107
22.            Колина И. Б. Нефропатии при злокачественных новообразованиях (лекция). // Альманах клинической медицины. 2014. № 30. С. 108–116