Нами было установлено методом экспресс — диагностики «Immunocomb Biogal», что 70 из 300 обследованных кошек (23,3 %) и 20 (16,7 %) из 120 собак имели высокий уровень специфических антител (1:128) к токсоплазме. Из современных методов диагностики токсоплазмоза плотоядных «Immunocomb Biogal» имеет большую диагностическую ценность, является доступным для практикующих ветеринарных врачей, компактным, высокочувствительным, специфичным, не требующим специального оборудования, высокой трудоемкости и специальных навыков лаборанта.
Ключевые слова: токсоплазмоз, кошки, собаки, иммуноферментный анализ, копрологический метод, серологический метод.
Введение: Токсоплазмоз домашних плотоядных (кошек и собак) широко распространенное инвазионное заболевание, которое вызывает широкий спектр клинических проявлений болезни, таких как: пневмонии, энтериты, конъюнктивиты, уретриты, энцефалиты, аборты, врожденные аномалии и мертворождение плода. Возбудитель поражает практически все системы организма. У животных чаще протекает хронически бессимптомно или латентно, реже остро и представляет серьезную угрозу для здоровья человека [1,4,5,6].
Кошке среди других представителей семейства кошачьих принадлежит основная роль в распространении этой инвазии [4]. Серологический скрининг поголовья кошек и собак в Казани выявил 15,8 % серопозитивных [4]. По данным сероэпизоотологического исследования в Перми установлено 35,1 % положительно реагирующих на токсоплазмоз собак [5], в Вологде — 32 %, в Москве, по результатам РФА-33,8 % и РСК-23,4 %, при копрологической проверке выявлено 7,3 % кошек, выделяющих ооцисты токсоплазм [6].
В Воронеже и Воронежской области, к сожалению, этот вопрос изучен недостаточно. Имеются отдельные публикации в этом направлении. Так Гапонов С. П., Меняйлова И. С. (2011) указывают на высокую зараженность кошек токсоплазмозом в осенне-зимний период (67,88 %) [7]. Аналогичные данные получила И. С. Волгина(2009), которая методом ИФА установила 67,5 % больных животных [8].
Для подтверждения диагноза, формирования стратегии этиотропной терапии, оценки эффективности лечения применяют разные лабораторные методы. В настоящее время не существует лабораторного метода, позволяющего избежать как ложноположительных, так и ложноотрицательных результатов. При диагностике токсоплазмоза необходима комплексная лабораторная диагностика (РНИФ, ПЦР, ИХА, выявление титров антител к антигенам возбудителя в ИФА и РСК), позволяющая выявить возбудителя и определить стадию заболевания и обосновать необходимость назначения специфических средств. Как правило, для этого требуются большие помещения, специально подготовленный персонал, дорогостоящее оборудование.
Целью нашей работы было сопоставление разных современных методов диагностики токсоплазмоза и определение наиболее эффективного с экономической и диагностической точки зрения.
Материалы иметоды исследований. Исследования проводили в ветеринарных клиниках города Воронежа и Воронежской областной ветеринарной лаборатории. Обследовано 300 кошек и 120 собак разных пород и возрастов, содержащихся в квартирах и частных домах. Для исследований брали венозную кровь по 1,5–2 мл от животного в вакуумные пробирки. Для получения сыворотки кровь центрифугировали на 1500 оборотах в минуту в течение 15 минут. Сыворотку крови от каждого животного исследовали параллельно методами ИФА, РСК и иммунохроматографическим (ИХА) с помощью тест системы VetExpert. Иммуноферментный анализ выполняли с помощью бесприборной тест системы Immunocomb Biogal (Израиль) для определения иммуноглобулинов класса G к Toxoplasma gondii, согласно инструкции. Для оценки количества антител использовали прибор CombScale, предоставляющийся в наборе, регистрировали визуально по интенсивности окрашивания цветной реакции метки (от S0 до S6). Положительными считали образцы интенсивность окрашивания которых отличалась от контрольной точки (S3- точка положительного контроля, которая должна дать четко выраженный пурпурно-серый цвет. Это тот же самый тон, что дает существенно положительный результат при титре антител к Toxoplasma Gondii 1:32).
Так же применяли другой способ чтения результатов с помощью прибора CombScan с использованием компьютера и TWAIN совместимого сканера. Гребень помещается в сканер, программа считывает цветовой результат и переводит в числовое значение. CombScan позволяет также сохранять полученные данные.
Реакцию связывания комплимента выполняли с применением набора диагностикумов (НПФ «Биоцентр», Омск). Результаты реакции считывали визуально и оценивали в крестах или в задержке гемолиза эритроцитов согласно «Методическим указаниям по лабораторной диагностике токсоплазмоза животных». Степень задержки гемолиза, выраженная крестами, соответствует следующим процентам гемолиза эритроцитов: гемолиз эритроцитов от 0 до 10 % (++++), от 10 до 40 % (+++), от 40 до 70 % (++), от 70 до 90 % (+), от 90 до 100 % (-). Результаты считали положительными при задержке гемолиза эритроцитов от (+++) в разведении 1:5. Иммунохроматографический анализ (ИХА) проводили с помощью тест системы VetExpert. Фекалии исследовали методом Дарлинга на наличие ооцист токсоплазм.
Результаты исследований. В результате диагностики методом ИФА с помощью иммуноферментной тест системы Immunocomb Biogal нами было установлено, что 70 из 300 обследованных кошек (23,3 %) имели высокий уровень специфических антител (1:128). Эту группу составляли животные с различными клиническими признаками (коньюнктивиты, энтериты, риниты, уретриты, маститы, нарушение репродуктивной функции, уродства плода) (рис.1,2). У 140 кошек (46,7 %) антитела были в диагностических титрах (1:64), у 20 (6,7 %) — реакция иммуноферментной тест-системы располагалась в пограничной зоне (1:32) — эту группу составили котята 1,5–2-х месячного возраста. Таким образом, 66,7 % кошек имели положительную реакцию, 70 животных (23,3 %) имели отрицательный результат.
Среди обследованных 120 собак-20 (16,7 %) имели высокий уровень антител (1:128). У 100 животных (83,3 %) результат был отрицательный. В этой группе также отмечались заболевания органов зрения, пищеварения, половой системы.
В результате исследования методом РСК с использованием набора диагностикумов (НПФ «Биоцентр») положительно в РСК реагировало 9 кошек (11,25 %). Исследование иммунохроматографическим методом (ИХА) с помощью тест системы VetExpert подтвердило диагноз у 15 % кошек и 8,35 % собак.
При копрологическом исследовании ни в одном случае ооцист токсоплазм обнаружено не было.
Заключение. При сопоставлении современных методов диагностики токсоплазмоза плотоядных было установлено, что тест система Immunocomb Biogal имеет большую диагностическую ценность, является доступной для практикующих ветеринарных врачей, компактной, высокочувствительной, специфичной, не требующей специального оборудования, высокой трудоемкости и специальных навыков лаборанта.
Литература:
- Вершинин И. И. Токсоплазмоз кошек и собак / И. И. Вершинин, Н. В. Телятникова, В. И. Петренко // Ветеринарная клиника.– 2003.–№ 1.– С.12.
- Митин В. Н. Как избежать токсоплазмоза / В. Н. Митин // Наука и жизнь.–1995.–№ 3.–С. 145–147.
- Петренко В. И. Паразитозы кошек и собак / В. И. Петренко, И. И. Вершинин, Н. В. Телятникова // Veterinaar meditsiin.– Тарту.– 1995. –С.53–67.
- Равилов Р. Х. Токсоплазмоз домашних плотоядных / Р. Х. Равилов, В. В. Герасимов, М. Н. Воробьева: Казань, 2008–98с.
- Сивкова Т. И. Сероэпизоотологические исследования при токсоплазмозе собак г. Перми / Т. И. Сивкова, Н. Н. Катаева//Российский паразитологический журнал. — 2008. — № 3. — С. 60–62.
- Олейников С. Н. Токсоплазмоз кошек в условиях мегаполиса (эпизоотология, диагностика, терапия и профилактика): Автореф. дис.... канд. вет. наук. – М., 2006. – 24 с.
- Гапонов С. П. Значение кошек в циркуляции антропозоонозов на территории г.Воронежа (на примере токсоплазмоза) / С. П. Гапонов, И. С. Меняйлова// Вестник Воронежского государственного университета: Воронеж.–2011.– № 2 –С. 134–137.
- Волгина И. С. Проблема токсоплазмоза в Воронеже/ И. С. Волгина//Вестник Мордовского университета.-2009.– № 1.– С.79–80.
