Морфометрическая характеристика тромбоцитов периферической крови больных хроническим лимфолейкозом (ХЛЛ)



Тромбоциты (кровяные пластинки) несмотря на отсутствие ядра в настоящее время причисляются к клеткам крови. Их количественные и качественные характеристики достаточно хорошо изучены. Морфология тромбоцитов сложна и зависит от их функциональной активности. Это единственные клетки крови, обладающие столь высокой степенью полиморфизма [3,6].

Основной функцией ТЦ считается участие в гемостазе [1,6]. Однако, появляется все больше данных об их участии в ряде физиологических и патологических процессов — воспалении, заживлении ран, метастазировании опухолей, противопаразитарной, противовирусной и антимикробной защите [3]. Это участие осуществляется за счет взаимодействия тромбоцитов с лейкоцитами крови (гранулоцитами, моноцитами и лимфоцитами) при помощи белковых молекул (или маркеров) активации, экспрессированных на их поверхностной мембране [2]. Дефицит численности и степени экспрессии молекул активации выявлен на мембране ТЦ при различной патологии и в том числе при лейкемии [2].

Известно, что для лейкозов и в частности хронического лимфолейкоза (ХЛЛ) характерна тромбоцитопения. Тем не менее, морфометрические особенности ТЦ при лейкозах изучены недостаточно, как и их роль в патогене лейкозов [3,4].

Целью работы являлось изучение диагностических и прогностических возможностей компьютерной морфометрии тромбоцитов крови при хроническом лимфолейкозе (ХЛЛ).

Материалы иметоды исследования. Было обследовано 63 больных ХЛЛ и 70 условно здоровых лиц (УЗЛ) обоего пола в возрасте от 35 до 65 лет. Кровь для исследования забирали из локтевой вены с соблюдением правил асептики, готовили мазки и окрашивали по Романовскому-Гимзе. Анализ количественного и качественного состава тромбоцитов (ТЦ) проводили при помощи морфометрической сетки Автандилова [5] и Image-Pro^®Plus системы с прилагаемой к ней программой IPWIN32.exe forWindows, Weiss Imaging, and Solutions GmbH. Цитоморфометрию проводили при увеличении х1250 (окуляр х15, объектив х100, числовая апертура х1,25). Морфометрия включала определение абсолютного числа тромбоцитов на 1см²сеткиАвтандилова, количество отдельных форм ТЦ, площади их гиаломера, грануломера, поляризации (степень вытянутости), а также количество отростков цитоплазмы в пересчете на 1 ТЦ и количественное соотношение тромбоцитов и лейкоцитов. Полученные данные математически обработаны при помощи программы SSPS.

Результаты исследования. Результаты морфометрии представлены в таблице, из которой видно, что ТЦ больных ХЛЛ отличаются от ТЦ УЗЛ по ряду параметров. В частности, у больных ХЛЛ снижены общее количество ТЦ на 1см²сетки (p<0,05), количество их зрелых (p<0,01) и старых (p<0,001) форм.

Вместе с тем резко повышена численность юных и дегранулированных форм (p<0,001 в обоих случаях), но не изменена численность дегенеративных форм ТЦ (p>0,05). Кроме того, на ТЦ больных ХЛЛ достоверно увеличено количество отростков цитоплазмы (p<0,05).

При ХЛЛ четко просматривается тенденция к снижению количества гранул в цитоплазме ТЦ и отношения площади цитоплазматических гранул к общей площади цитоплазмы(p>0,05 в обоих случаях).

Таблица 1

Морфометрическая характеристика тромбоцитов (ТЦ) периферической крови больных хроническим лимфолейкозом (ХЛЛ)

№	Показатель (в пересчете на 1 мм2сетки)	УЗЛ (контоль) (n=70), M±m	Больные ХЛЛ (n=63), M±m
1.	Общее количество ТЦ	1935,64±31,9	1804,41±31,3*
2.	Количество зрелых ТЦ	781,82±21,2	624,63±18,7**
3.	Количество юных ТЦ	598,76±18,7	823,81±23,3***
4.	Количество старых ТЦ	501,69±14,8	110,61±9,3***
5.	Количество дегранулированных ТЦ	52,43±6,0	224,24±10,9***
6.	Количество дегенеративных ТЦ	21,16±0,87	22,22±14,63
7.	Средняя площадь ТЦ (мм2)	8,26±2,4	10,74±2,6
8.	Степень поляризации (вытянутости) ТЦ	1,23±0,7	2,3±0,94
9.	Площадь гиаломера (мм2)	4,91±1,88	5,35±1,8
10.	Количество цитоплазматических гранул (на 1 ТЦ)	4,21±1,9	2,34±1,03
11.	Количество отростков цитоплазмы (на 1 ТЦ)	3,47±1,4	8,32±1,5*
12.	Отношение площади цитоплазматических гранул к общей площади цитоплазмы	0,87±0,8	0,28±0,3
13.	Количество ТЦ на 1 ЛЦ	11,02±2,8	27,37±3,8*
Примечание — * — p<0,05; **- p<0,01; ***- p<0,001.

Структура численности субпопуляций ТЦ в зависимости от группы обследованных лиц представлена на рис.1. На диаграмме хорошо видно, что если в крови УЗЛ основные формы ТЦ (зрелые, старые, юные) присутствуют в практически равных долях, то у больных ХЛЛ четко преобладают юные и дегранулированные формы.

Рис. 1. Субпопуляции тромбоцитов венозной крови УЗЛ и больных ХЛЛ

Известно, что накопление субпопуляции юных ТЦ имеет место при активации процессов их элиминации, например, при тромбоцитопенической пурпуре [2,3]. В этой связи можно допустить, что при ХЛЛ имеет место активация процессов элиминации или массивной гибели ТЦ.

Несмотря на выявленные морфологические особенности ТЦ больных ХЛЛ по ряду морфометрических параметров они не отличаются от ТЦ УЗЛ. В частности степень поляризации (вытянутости), площадь гиаломера и количество цитоплазматических гранул в ТЦ больных ХЛЛ практически не отличается от ТЦ УЗЛ (p>0,05). Математически не достоверно и снижение отношения площади цитоплазматических гранул к общей площади цитоплазмы (рис.2). Однако, на диаграмме хорошо видно, что отсутствие математически значимого снижения показателя связано с высокой степенью погрешности вычисления, точнее — с высокой степенью дисперсии. Вместе с тем линия тренда (линейная зависимость), указывает на четкую тенденцию к снижению данного показателя у больных ХЛЛ.

Рис. 2. Отношение площади цитоплазматических гранул к общей площади цитоплазмы

На наш взгляд, дисперсия показателя, скорее всего, обусловлена малой выборкой или неоднозначностью признака для ХЛЛ. Тем не менее, мы допускаем, что морфометрическое определение этого показателя в ТЦ больных ХЛЛ может быть использовано в качестве теста выбора при обследовании не только больных ХЛЛ, но и больших групп УЗЛ, занятых на вредных производствах, на предмет доклинического выявления заболеваний крови.

Внимания заслуживает и выявленный нами факт резкого повышения отношения ТЦ/лимфоцит у больных ХЛЛ (таблица). Увеличение этого показателя более чем в два раза, может указывать на участие ТЦ в процессе элиминации функционально и/или морфологически не состоятельных лимфоцитов. То есть, на саногенетическую роль ТЦ при ХЛЛ.

Таким образом, исследование показало, что у больных ХЛЛ снижено общее количество ТЦ на 1см²сеткиАвтандилова, за счет снижения количества зрелых и старых форм. Вместе с тем резко повышена против УЗЛ численность юных и дегранулированных ТЦ, достоверно увеличено количество отростков цитоплазмы, но снижено количество гранул. Эти наблюдения свидетельствуют как о повышенной активности ТЦ, характерной для неопластических процессов [2], так и высокой скорости их элиминации, характерной для аутоиммунных процессов [1,4]. Кроме того, выброс в кровоток больных ХЛЛ молодых ТЦ с низким числом гранул свидетельствует, на наш взгляд, о существенной активации мегакариоцитарного ростка гемопоэза и важной роли ТЦ в патогененезе ХЛЛ.

На наш взгляд использование компьютерной морфометрии ТЦ имеет большие прогностические возможности в дифференциальной диагностике лейкозов, а так же может быть использовано при определении вероятности перехода острого лимфолейкоза в хроническую форму.

Литература:

1. Ahmad R, Menezes J, Knafo L, Ahmod A (2001) Aktivated platelets express Fas-L and induce apoptosis in Fas-positiv tumor cells. J LeukocBiol 69: 123–128
2. Breen, K. A., Grimwade, D., & Hunt, B. J. (2012). The pathogenesis and management of the coagulopathy of acute promyelocyticleukaemia. British Journal of Haematology, 2012, V 156 (1), pp.24–36.
3. Janeway CA, Travers P, Walport M, Shlomchik M (eds) (2001): Immunobiology. New York, Churchill Livingston
4. Philipp von Hundelshausen, Christian Weber Platelets as Immune Cells Circulation Research.2007; 100: 27–40 doi: 10.1161/01.-RES. 0000252802.25497.b7
5. Автандилов Г. Г. // Медицинская морфометрия. / Руководство М., Медицина, 1990–384с.
6. Коробова Ф. В. Компьютерная морфометрия тромбоцитов периферической крови здоровых людей.Автореф. дисс. К.м.н.,Москва 2001 г.,25 с.