Меланома кожи (МК) – одна из самых агрессивных опухолей организма человека [1]. На фоне диспластического невуса (ДН) МК возникает у 30-50% больных МК [2]. BRAF – протооонкоген, мутации которого обнаруживаются у 40-70% больных МК [3]. Антиген Ki-67 – ядерный протеин, являющийся маркером пролиферации клетки [4]. Трудности диагностики МК и ДН возникают на начальных стадиях МК, а ведь именно в этот период определяется начало злокачественной трансформации клеток, происходит выбор средств терапии [5]. Методом, позволяющим уточнить диагноз, может являться иммуногистохимическое исследование (ИГХ) с определением пролиферативной активности (ПА) Ki-67, которая в ДН составляет до 20% экспрессии в ядрах опухолевых клеток, а в МК – более 30% .
Цель исследования - изучить отличительные морфологические и молекулярно-генетические особенности МК и ДН, проанализировав характер мутаций гена BRAF и изменения уровня экспрессии маркера клеточной пролиферации Ki-67 при МК и ДН.
Материалы и методы. Исследования проводились на базе ФГБУ «РНИОИ» МЗ РФ в 2016 году. Изучены опухоли кожи с диагнозами ДН (15 наблюдений) и МК (10 наблюдений). После фиксации, обезвоживания и заливки в парафин, срезы окрашивали гематоксилином и эозином. Микроскопические изменения изучали на светооптическом уровне с помощью микроскопа «Zeiss AxioLab-A1» и фотокамеры «Olympus». Исследование Ki-67 проводили с использованием моноклональных антител «Dako». При определении индекса пролиферации (ИП) Ki-67 подсчёт количества ядер проводился в программе «Adobe Photoshop CS5.1» при помощи функции «Analysis» (count tool). Для выявления мутации гена BRAF использовался метод определения полиморфизма длины ретракционных фрагментов (ПДРФ), амплификация проводилась на приборе «BIS- Thermocycler». Полученные данные обработаны при помощи программы «Statistica 6.0».
В 2-х случаях МК возникала на фоне ДН. Медиана возраста больных – 56 лет (37 лет – 81 год). Женщин с МК было 7, мужчин – 3. В 40% случаев опухоли были расположены на нижних конечностях, в 33% - на туловище, в 20% - на верхних конечностях, в области лица – у 7% больных. III уровень инвазии по Кларку – 50%, IV- 35%, V- 15%. Узловая меланома была диагностирована у 80% больных, поверхностно-распространяющаяся – у 20%. Гистологически в МК (рис.1) имели место крупные меланоциты, наличие патологических митозов, различное количество меланина: от значительного количества до полного его отсутствия. Гистологическое исследование ДН (рис.2) показало меланоцитарную атипию, незначительный полиморфизм меланоцитов.
Гистологическое исследование
Рис.1. Меланома кожи Рис.2. Диспластический невус
Для уточнения диагноза было проведено исследование пролиферативной активности (ПА) Ki-67. У больных с диагнозом ДН разброс показателей экспрессии антигена Ki-67 составил от 9,3 до 11,7%, в МК ПА составляла от 34 до 47,9% (рис.3,4). В ряде наблюдений МК при наличии регионарных метастазов была определена мутация гена BRAF. В ДН данная мутация отсутствовала.
Экспрессия антигена Ki-67
Рис.3. Диспластический невус Рис.4. Меланома кожи
МК характеризовались более высокой ПА по сравнению с ДН (индекс ПА в МК превосходил таковой в ДН почти в 4 раза). Молекулярно-генетическая диагностика на предмет мутаций гена BRAF позволила дифференцировать МК от ДН при наличии регионарных метастазов.
Литература:
- Patel S. GNA-11 mutation in a patient with cutaneous origin melanoma: a case report / S. Patel, D. Kim, C. Lacey // Journal of Medicine. – 2016. - № 95. - Р. 23-27.
- Молочков, В.А. Меланоцитарные невусы / В.А. Молочков // Практическая медицина. – 2011. - Т.5. - №37. - С.36-40.
- Смирнов, С.Ю. Гетерогенность мутационного статуса 600 кодона гена BRAF в метастазах меланомы кожи / С.Ю. Смирнов, А.М. Пашкевич, Е.А. Гутковская, М.Р. Смолякова, А.Г. Жуковец // Вторая белорусско-польская дерматологическая конференция: дерматология без границ : сб. науч. ст. — Гродно, 2015. — С. 72–75.
- Klauschen, F. Der standartised Ki- 67 Diagnostik mit automatisierten Scoring / F. Klauschen, S. Wienert, W.D. Schmidt // Clinical Cancer Research. – 2015. – Vol.15, №4. – Р. 11-16.
- Анисимов, В.В. Стандартное обследование пациентов с подозрением на меланому: современная клиническая классификация / В.В. Анисимов // Практическая онкология. – 2011. - №8. - С.12-22.
- Саламова, И.В. Роль иммуногистохимии в дифференциальной диагностике новообразований кожи меланоцитарного генеза / И.В. Саламова, О.Л. Москалева, Г.А. Флакс // Иммунопатология, аллергология, инфектология. – 2015. - №1. - С. 78-83.
