Rh-Hr эритроцитарнные групповые антигены и В и С вирусные гепатиты

К настоящему времени накоплен большой фактический материал в отношении ассоциаций тех или иных аллоантигенов с развитием различных видов как инфекционной, так и соматической патологии.

Мы изучили связь между Rh эритроцитарными антигенами и вируснимы (B и C)  гепатитами. Работа выполнена в Иммуногенетической лаборатории в Батумского Государственного Университета (Грузия). Материалом исследования служили пробы крови (эритроциты, сыворотки), 90 инфицированный с вирусными гепатитами (47 HBS- Ag -positive, 40 HCV-Ag -positive, 3 HBS и HCV -positive). Для оценки частоты антигенов и аллелов эритроцитов среди инфицированных в качестве контрольной группы использована популяция здоровых лиц (485 жителей Аджарского АР, Грузия). Для определения антигенов системы применяли экспресс-метод с универсальными моноклональными антителами.

Среди контингента инфицированных в целом чаще выявлялись антиген С, фенотипы сcddee, CCDee и  СcDee. Генотип СС в большей  степени склонен к инфицированию гепатитом В. В инфицированных этим вирусом носители генотипа СС, по сравнению с донорами, встречаются  более 2,1 раза. В инфицированных гепатитом В также высок удельный вес гетерозиготного  положения этого же гена (Сс). Реже встречались лица с фенотипом ссDEE и ccDee, а также гомозиготы ЕЕ.  Как видно носители Cde и cDE гаплотипов меньше  заболевают вирусными гепатитами. cDe  с низкой частотой  встречается  в инфицированных гепатитом В и  определенным образом представляют «защитный» знак к инфицированию.

 

Введение

Система Rh – одна и наиболее полиморфных антигенных систем эритроцитов человека [1,2]. Она включается около 50 серологически различимых антигенов, не считая слабых, переходных и парциальных форм [3, 4, 5,6]. Rh антигени  кодируются двумя генами, RhD и RHCE, расположенными на коротком плече хромосомы 1 в локусе Rh между 1р34.3 и 1р 36.13 [7,8,9].

Своеобразие антигенов Rh-Hr проявляется целым рядом признаков. В противоположность групповым полисахаоидам А и В, широко распространенным в природе, антигени резус содержатся только в эритроцитах человека и некоторых видов высших обезьян [10].

Являясь структурными белками мембраны эритроцитов [11,12,13,14] антигены Резус принимают участие в обменных процессах клетки и газотранспортной функции организма. Их отсутствие сопровождается неправильной формой эритроцитов, повышенной склонностью к гемолизу, анемией.

Сведений о предрасположенности лиц с различным Rh-фенотипом к той или иной патологии существенно меньше, чем различий по системе АВ0, причем во многих публикациях речь идет только об антигене Rh_o(D) [15, 16]. Такое положение во многом обусловлено редкостью, дефицитом и дороговизной тест-систем против антигенов С, с, Е, е, C^w системы Rh в прежние десятилетия. Проблема дефицита этих реактивов была решена лишь в последние несколько лет. Следует отметить, что к настоящему времени подобные исследования, проведенные с учетом минорных антигенов Rh, единичны. Имеется сообщение о неодинаковом содержании триглицеридов в сыворотке крови лиц с различными CDE-фенотипами [15, 16].

Особенно большой интерес вызывает ассоциация групповых антигенов с вирусными (В и С) гепатитами, потому что это широко распространенная инфекция человека.  Почти одна треть человеческой популяции заражена гепатитом  В. Каждый год  1 миллион человек умирает от этой болезни. гепатитом С заражена 0.5- 2% всемирной популяции [17, 18]. Кроме того, Грузия относится к территории с высокой  эндемичностью ГВ риск заражения этой инфекцией  в течение жизни составляет более 60% [19, 20].

 В литературе очень скудны данные  по мировому масштабу ассоциации ABO групп крови с вирусными гепатитами  [21, 22] . В доступной литературе нам не удалось найти каких-либо сведений о распределении Rh-Hr минорных эритроцитарных антигенов среди с вирусными В и С гепатитами.  

 

 

 МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена в Иммуногенетической лаборатории в Батумском Государственном Университете (Грузия).

Материалом исследования служили пробы крови (эритроциты, сыворотки), 90 инфицированный с вирусными гепатитами (47 HBS- Ag -positive, 40 HCV-Ag -positive, 3 HBS и HCV -positive).

Для оценки частоты антигенов эритроцитов среди больных и инфицированных в качестве контрольной группы использована популяция здоровых лиц (485 жителей Аджарского АР, Грузия).

В работе использованы общепринятые методы иммуносерологического исследования эритроцитов и сывороток крови. Для определения антигенов Rh системы применяли экспресс-метод с универсальными моноклональными антителами. В работе использованы тест-системы  со специфичностью анти-D, -C, -c, -E, -e (OОО «Гемостандарт», Москва), стандартный 0(I), A(II), B(III) эритроциты и сыворотки.

Частоту генов и гаплотипов системы Rh рассчитывали, используя следующие формулы:

                                 D = 1 - ;

                                                         C = 1 - ;

                                                        E = 1 - ;

                                                       c = 1 - ;

                                                        e = 1 -

где D, C, E, c, e – частоты генов, dd, cc, ee, CC и EE – частота соответствующих фенотипов в долях единицы соответственно. Расчеты частоты гаплотипов системы Rh проводили по формулам, предложенным A. E. Mourant

                                                              cde = ;

                                                             Cde =;

                                                                cdE = ;

                                                                cDe =;

                                                cDE = - сdE;

                                                 CDe =- Сde;

                                                             CDE=

 

где ccddee, Ccddee, ccddEe, ccDee, CCDee и ccDEE – частота соответствующих фенотипов в долях единицы.

Частоты  алелей RhD, d:

                                       q =                     p= 1-q

где  - число лиц, гомозиготных по рецессивному гену (dd), N- обьем выборки.

 

 

Результаты

 

При исследовании выявлена положительная корреляция гепатита В к одному из значительному фактору Rh системы, минорному D  фактору (картина 1). В сравнении с контрольной  группой в инфицированных лицах была замечена высокая частота распространения D  антигена. Соответственно, в них высока концентрация  p(D)  аллели (картина 2). Можно сказать, что носительство D  аллели и, соответственно, экспрессия антигена D  на поверхности эритроцитов как бы определяет склонность к заболеванию.

                

                   

Картина 1.  частота  распространения антигенов Rh  системы в  донорах  и инфицированных вирусным гепатитом.

 

Картина 2.  Концентрация p(D)  и q (d) аллелей в больных вирусным B и C гепатитом и в донорах.

 

В лицах, инфицированных гепатитом С и В, высок процент  носительства антигена С (Картина 1). Особенно надо отметить гепатит В, т. к. в нем представлен большой  процентный показатель, чем в гепатите С. Частота распространения Е и С антигенов и концентрация аллелей в донорах намного выше, чем в инфицированных (Картина 3). Можно  предположить, что носители Е и С аллелей сохраняют стойкость к инфицированию.   В большей степени подчиняются инфицированию лица, на мембране эритроцитов которых экспрессированы С и D  антигены.

                         

Картина 3. Концентрация p(C)  и q (c),  p(E) и q(e) аллелей в больных вирусным гепатитом и в донорах.

 

СС генотип в большей степени подчиняется инфицированию гепатитом В. В инфицированных этим вирусом отмеченный генотип встречается 2,1 раза больше в носителях, чем в донорах. В них также высок удельный вес гетерозиготного положения этого же гена (Сс). Отмеченный генотип с еще большей частотой представлен в инфицированных гепатитом С. А рецессивная гомозигота (сс) наоборот, в большей степени встречается в донорах и характеризуется определенным образом резистентностью к инфицированию. В этом отношении склонностью характеризуется Ее генотипная группа  (Картина 4). А в носителях ЕЕ доминантных гомозиготных групп инфицирование вирусным гепатитом снижено даже на теоретическом уровне.

                       

Картина 4. частота распространений СС, Сс, сс, ЕЕ, Ее, ее генотипов в больных вирусными гепатитами и  в донорах.

 

При исследовании фенотипов Rh системы в инфицированных гепатитами выявлено семь фенотипных групп – CcDEe, CCDee, CcDee, ccDEe, ccDee, Ccddee и ccddee. ccDEE  фенотип представлен только  в контрольной группе (донорах). Выявилась  сравнительная   и частичная стойкость фенотипов - ccDEe, ccDee к инфицированнию. Из перечисленных надо отметить ccdee  фенотип, который по  сравнению с инфицированными дважды и трижды  больше представлен в донорах (Картина 5).

                      

Картина 5. Частота распространений Rh  фенотипов в больных и здоровых популяциях.

 

К подчиненным инфицированию фенотипам относятся  CCDee  и  CcDee. CCDee  фенотип чувствителен к вирусу гепатита В.

Из семи Rh гаплотинов в инфицированных встречаются три – cde, cDe, Cde. Как видно, носители  Cde и cDE  гаплотипов редко заражаются вирусными гепатитами. Cde  гаплитипы  в незначительной концентрации встречаются  в донорах, но достоверные данные имеются и в случае cDE  гаплотипа. cDe  гаплотип меньше представлен в инфицированных гепатитом В, всего 2,5 раз меньше по сравнению с донорами и определенным  образом является  «защитным» знаком к инфицированию. А в популяции инфицированных   вирусным гепатитом С их концентрация незначительно высокая. СDe  гаплотип представлен 1,21 раз больше в инфицированных гепатитом В  по сравнению с донорами, а его концентрация в инфицированных  гепатитом С ниже  на 1,73 раза  (Картина 6).

                          

Картина 6. Концентрация  Rh  гаплотипов  в больных  и в контрольной группе.

 

     Поскольку все аллоантигены представляют  продукт серологически выявленного соответствующего гена, возможно с достаточно высокой  точностью  и к тому же перспективно изучение коррелятивной связи  между эритроцитарным  составом  и разного  вида патологией.

Исследование в этом направлении даст возможность подытожить, экспрессия какого группового антигена ассоциируется  с вышеназванными патологиями. Изучением  частоты распространения  эритроцитарных антигенов у больных и их  сравнением  со здоровыми донорами станет возможным  выделить индивиды высокого риска, предрасположенные к заболеванию и с целью его избежание провести профилактические мероприятия.

Установленная частота антигенов Rh среди инфицированных B и С гепатитамы может быть использована для медико-генетической характеристики групп больных с различными видами патологии.

 

 

Список Литературы:

1. Avent ND, Reid ME. The Rh blood group system: a review. Blood. 2000; 95: 375–87.
2. Instee O. J. Blood group active surfase molecules of the human red blood cells. Vox Sang. 1990. V. 58. P. 1-20.
3. Wiener A. S., Geiger  J., Gordon E. B. Mosaic  nature of the Rho factor of human blood.//Exp. Med. Surg.-1957.-V. 15.- P. 75-82
4. Race  R.R.  The  Rh  genotypes  and Fisher’s theory. //blood. -1948, suppl.-V.2.-P.27-42.
5. Fisher R., Race R.R. Rh gene frequencies in Britain.//Nature, London.-1946.-V.157.-P.48-49.
6. Rosenfield R., Allen F. H., Swisher S., Kochwa S. A review of Rh serology and presentation of a new terminology.//Transfusion.-1962.-V.2- P.287-312.
7. Cherif-Zahar B., Mattei M.G., Le Van Kim. C., Bailly P., Cartron J. P., Colin Y. Localization of the human Rh blood group gene structure to chromosome region 1р34.3 и 1р 36.13 by in situ hybridization.//Hum.Genet.-1991.-V.86. P398-400
8. MacGeoch C., Mitchell C. J., Carritt B.,  Avent N. D., Ridgwell K., Tanner M.J.A., Spurr N. K. Assignment of the chromosomal locus of the human 30 kDal Rh (Rhesus) blood group –antigen-related protein (Rh30) to chromosome region  1p36.13-p34.//Cytogenet. Cell Genet.-1992.-V.59.-P.261-263.
9. March W. L., Chaganti R.S.K., Gardner F.h., Mayer K., Nowell P.C., German J. Mapping human autosomes: evidence supporting the assignment of rhesus to the short arm of chromosome No. 1. //Science.-1974.-v.183.-P.966-968
10. Levine P., Celano M., Fenichel R., Pollack W., Singher  H. A “D-like” antigen in Rhesus monkey, human Rh positive and human Rh negative red blood cells//J. Immunol.1961. Vol. 87. P747.
11. Moore S., Woodrow  C.F., McClelland D.B.L. Isolation of membrane components associated with human red cell antigens  Rh (D), (c), (E), and  Fy.//Nature. 1982. V. 295. P. 529-531.
12. Ridgwell K., Roberts J., Tanner M., Anstee D. J. Absence of two membrane  proteins  conteining extracellular thiol groups in Rhnull human erythrocytes.//Biochem. J. 1983. V. 213. P. 267-269
13. Hughes-Jones N. C., Bloy  C., Gorick B., Blanchard D., Doinel C., Rouger P., Carton J. P. Evidence that the c, D and E epitopes of the human Rh blood group system are on separate polypeptide molecules. //Mol. Immunol. 1988. V. 25. P. 931-936.
14. Gahmberg C. G. Molecular characterization of the human red cell Rh0 (D) antigen.// EMBO J. 1983. V.2. P. 223-27.

15.  Шабалин В. Н., Серова Л. Д. Клиническая иммуногематология. – Л.: Медицина, 1988. – 312 с.

16.  Серова Л. Д. Иммунологические маркеры клеток крови в норме и при некоторых видах патологии. Автореф. дисс. докт. Л., 1980. – 32 с.

17. Zuckerman JN, Zuckerman AJ. The epidemiology of hepatitis B. Clin Liver Dis 1999;3:179-87.
18. Goldstein ST, Alter MJ, Williams IT, Moyer LA, Judson FN, Mottram K, et al. Incidence and risk factors for acute hepatitis B in the United States, 1982-1998: implications for vaccination programs. J Infect Dis 2002;185:713-9.
19. Kane MA. Global status of hepatitis B immunization. Lancet, 1996, 348: 696.
20. Expanded Programme on Immunization. Global Advisory Group – Part I. Weekly Epidemiological Record, 1992, 67: 11−15.
21. Kiango JS., Missingo R., Mzula E. The relationship of blood groups and hepatitis B virus antigen carrier state. East Afr Med J. 1982;59(12):816-8.
22. Karsonskaia Ria, Roqotskaia LT. Relationship of the incidence of the HBsAg carrier state to ABO and Rhesus blood group systems. Vrach Delo. 1981. (9): 119-21.