Перспектива цитохимических исследований при травме глаза



Актуальность проблемы. Травмы глаза и лечение их последствий остаются одной из острейших проблем офтальмологии. Частота травм глаза не имеет тенденции к снижению. Все травмы глаза таят в себе угрозу развития тяжелых осложнений — от обычного воспалительного процесса до аутоиммунного поражения обоих глаз, приводящих к необратимой слепоте. В этой связи особо остро стоит вопрос профилактики осложнений травмы глаза [2, 3, 5].

Как правило, исход травмы глаза зависит не только от своевременности обращения больного, квалификации офтальмохирурга, но и состояния иммунной системы больного. Одним из ведущих механизмов защиты от вторжения чужеродной информации является фагоцитоз. Высокая активность фагоцитов, безусловно, способствует снижению риска развития гнойно-воспалительных осложнений при травме глаза. Одну из ключевых функций в антимикробной активности нейтрофилов играет фермент миелопероксидаза, которая наравне с катионными белками является надежным критерием оценки фагоцитарной активности клеток [6]. Низкая функциональная активность фагоцитов является одним из ведущих факторов риска развития гнойно-воспалительных осложнений при любой травме, в том числе и травме глаз [1].

Целью исследования являлось определение активности миелопероксидазы как показателя фагоцитарной активности лейкоцитов крови и конъюнктивы у пациентов с травмами глаза

Материалы иметоды исследования. Было обследовано 47 больных обоего пола в возрасте от 18 до 55 лет (в среднем 38,5±4,2 лет), поступивших в Научно-клинический центра Государственного медицинского университета Туркменистана. Контрольную группу составили 50 условно здоровых лиц (УЗЛ) обоего пола в возрасте от 20 до 45 лет (в среднем 33,7±2,5 года) без патологии глаз и не имеющих указаний на травму глаза в анамнезе.

Помимо традиционного клинико-инструментального обследования в нейтрофилах крови и конъюнктивы цитохимическим способом определяли активность миелопероксидазы (МПО) по Грэхему-Кноллю [4]. Для этого из периферической крови и содержимого конъюнктивы обследуемых лиц (как УЗЛ, так и больных с травмой глаза) готовили мазки на предметных стеклах, высушивали, фиксировали 4 % спиртовым раствором формалина, промывали, снова высушивали и погружали в бензидиновый реактив на 30 секунд. Затем мазки повторно промывали в проточной воде, высушивали, окрашивали азур-эозином и микроскопировали с использованием иммерсии. Активность фермента проявлялась в виде гранул золотисто-коричневого цвета в цитоплазме нейтрофила. Результат реакции выражали как в виде числа МПО-положительных нейтрофилов на 100 лейкоцитов, так и в виде среднего цитохимического коэффициента (СЦК) по Астальди в модификации Kaplow [4]. Полученные результаты математически обработаны с использованием программы SPSS.

Результаты исследования. Исследования показали, что возраст пациентов с травмами глаза колеблется от 18 до 55 лет. Максимальное число больных (63,8 %) приходится на возраст от 26 до 45 лет (рис.1). Другими словами в подавляющем большинстве случаев травмы глаза получают лица молодого трудоспособного возраста.

Рис. 1. Возрастные группы обследованных больных с травмой глаза (в %)

При поступлении проникающее ранение роговицы (ПРР) диагностировано у 33 больных, корнеосклеральное ранение (КСКР) — у 8, склеральное (СКР) — у 4 пациентов и прободное ранение глаза (ПРГЛ) — в 2 случаях (рис.2). На диаграмме видно, что более 70 % случаев приходится на проникающие ранения роговицы и почти 20 % — на корнеосклеральные ранения. СКР и ПРГЛ встречаются значительно реже (рис.2).

Рис. 2. Структура ранений глаз (в %)

Было установлено, что активность МПО в нейтрофилах крови и конъюнктивы УЗЛ различна. В частности, как процент МПО-положительных клеток, так и СЦК фермента в нейтрофилах конъюнктивы достоверно снижены по сравнению с нейтрофилами крови (табл.). Следует отметить, что если в нейтрофилах крови активность МПО проявляется в виде хорошо оформленных гранул, то в нейтрофилах конъюнктивы — в 60 % случаев МПО имеет «размытый» характер (рис.3).

Таблица 1

Активность миелопероксидазы (МПО) внейтрофилах крови иконъюнктивы упациентов стравмой глаза

№п/п	Группа	СЦК МПО		% МПО-положительных нейтрофилов
		крови	конъюнктивы	крови	конъюнктивы
1.	УЗЛ	1,98±0,07	1,7±0,03*	98,3±1,7	92,1±1,3*
2.	При поступлении	1,80±0,08+	1,4±0,09*+	92,2±1,4+	84,7±1,7*+
3.	При выписке	1,92±0,05	1,60±0,05*	96,8±2,1	89,3±1,2+

Примечание: * — достоверность различия по отношению к показателю в нейтрофилах крови при p<0,05; ^{+ —} достоверность различия показателя по отношению к контролю при p<0,05.

Рис.3. Активность миелопероксидазы (МПО) в нейтрофилах периферической крови и конъюнктивы условно здорового человека: (МПО-отрицательный лимфоцит, МПО-положительные моноцит и нейтрофил УЗЛ (А). МПО-положительный нейтрофил конъюнктивы УЗЛ (В)

У больных с травмами глаза при поступлении в стационар активность МПО как в нейтрофилах крови, так и конъюнктивы в целом по группе достоверноснижена по отношению к контролю (p<0,05 в обоих случаях). При этом снижено как число МПО-положительных лейкоцитов, так и СЦК фермента. Кроме того, если СЦК МПО в нейтрофилах конъюнктивы УЗЛ составляет 85,5 % от значений СЦК в нейтрофилах крови, то при травме глаза — 77 %. Что может указывать на более выраженный расход фермента фагоцитами при травме глаза (рис.4).

Рис. 4. Активность миелопероксидазы (МПО) в нейтрофилах перифе-рической крови и конъюнктивы у больного ПРР. (МПО-отрицательный моноцит и 2 МПО- положительных нейтрофила больного ПРР (А). Разрушенные нейтрофилы конъюнктивы больного ПРР (В))

При выписке из стационара активность фермента в нейтрофилах крови практически восстанавливается (табл.). При этом восстанавливается как процент МПО-положительных клеток, так и СЦК фермента. В нейтрофилах конъюнктивы активность МПО увеличивается по отношению к таковой при поступлении, но процент МПО-положительных клеток и СЦК МПО остаются достоверно сниженными по отношению к уровню УЗЛ (p<0,05 в обоих случаях).

Нам представилось информативным вычисление процентного отношения (ПО) величины СЦК МПО в нейтрофилах крови по отношению к нейтрофилам конъюнктивы (ПО СЦК). Этот показатель в группе УЗЛ составил 85 %. То есть СЦК МПО нейтрофилов конъюнктивы составляет 85 % от величины СЦК МПО нейтрофилов крови. У больных с ранениями глаза ПО СЦК составил 77 %. При завершении раневого процесса величина ПО СЦК у больных значительно увеличивается, но остается несколько ниже уровня контроля (рис.5).

Рис. 5. Отношение величины СЦК МРО в нейтрофилах конъюнктивы к СЦКМПО в нейтрофилах крови в зависимости от группы обследованных лиц

Мы обратили внимание, что при травме глаза высокая активность МПО в нейтрофилах конъюнктивы увеличивает вероятность развития воспалительных осложнений. Так, у больных КСКР с вяло текущим воспалительным процессом величина ПОСЦК составила 94,7 % за счет высокого СЦК МПО в нейтрофилах конъюнктивы. На наш взгляд это связано с пониженной реализацией функций фагоцитов конъюнктивы в очаге травмы и является прямым показанием к назначению препаратов, стимулирующих функциональную активность фагоцитов.

Таким образом, цитохимическое выявление активности одного из ведущих ферментов респираторного взрыва — миелопероксидазы в нейтрофилах крови и конъюнктивы, на наш взгляд, является информативным критерием оценки исхода травмы глаза.

Выводы.

1. При травме глаза снижена активность миелопероксидазы как в нейтрофилах крови, так и конъюнктивы.
2. Транзиторное снижение активности МПО нейтрофилов на фоне прогрессирующего падения активности фермента в нейтрофилах конъюнктивы свидетельствует об адекватной динамике реакции фагоцитов на травматическое повреждение тканей глаза.
3. Чем более выражено снижение активности миелопероксидазы в нейтрофилах конъюнктивы при поступлении пациента с травмой, тем лучше прогноз течения раневого процесса.

Литература:

1. Базарный В. В., Тихонина Е. Н. и др. Определение миелопероксидазы нейтрофилов при хирургическом лечении ишемической болезни сердца // Клиническая лабораторная диагностика. — 2012. — № 7. — с. 8–10.
2. Гундорова Р. А. Приоритетные направления в проблеме глазного травматизма // Вестник офтальмологии. 2004. — Т. 120, № 1. — с. 12.
3. Ермолаев В. Г., Сердюков А. Г. и др. Промышленный травматизм органа зрения по данным госпитализации // Российская академия медицинских наук. Бюллетень Национального научно-исследовательского института общественного здоровья. — 2005. — № 1. — с. 125–128.
4. Кваглино М., Хейхоу Н. Цитохимические методы исследования. // М:Медицина, 1978, 267 с.
5. Либман Е. С., Шахова Е. В. Слепота и инвалидность по зрению в населении России // Съезд офтальмологов России, VIII–й: тез. докладов. — М., 2005. — С.78–79.
6. Рулева Н. Ю., Звягинцева М. А. и др. Миелопероксидаза: биологические функции и клиническое значение. // Современные наукоемкие технологии. — 2007. — № 8. — с. 1–4.