Содержание фосфолипидов в иммунокомпетентных клетках экспериментальных крыс



Фосфолипиды (ФЛ) составляют наибольшую часть липидов мембран клеток. ФЛ являясь структурным компонентом мембран клеток, участвуют в дыхании, окислительном фосфолировании, переносе адениловых нуклеотидов, присоединении и изолировании ферментов, изменении конформации ферментов и клеток, в процессе их дифференциации, в рецепции гормонов, антигенов и антител. Они участвуют в обеспечении проницаемости мембран клеток и транспорте метаболитов между клеткой и внеклеточной средой.

Фракции ФЛ выполняют различные функции: фосфатидил серин (ФС) и кардиолипин (КЛ) участвуют в транспорте Са +2, фосфатидил этаноламин (ФЭ) — ионов калия, а кардиолипин (КЛ) — кальция нервных и мышечных клеток. КЛ ингибирует транспорт ионов натрия, а ФС и ФЭ усиливая транспорт этого иона регулирует активность К- и Na- зависимой АТФ — азы. ФЭ и ФХ (1,2) влияют на активность мембраносвязанных цитохромоксидаз (ЦХО).

Фосфатидилинозитол (ФИ) участвует в передаче сигнала внутри клетки и является посредником в процессе активации иммунокомпетентных клеток (3,4). Сфингомиелин оказывает влияние на активность ферментов, участвующих в процессе транскрипции (5,4), следовательно, различные воздействия на организм сопровождаются изменениями в составе липидов мембран первично повреждённого органа. Несмотря на важное значение этого вопроса, данных о составе и количестве липидов мембран лимфоцитов органов незначительны. Отсутствуют данные о связи функций иммунокомпетентных органов.

Изучение молекулярных механизмов действия антигенов, антител и иммуномодуляторов выдвигает проблемы изучения липидов мембран иммунокомпетентных клеток на передний план научных исследований. Липиды мембран лимфоцитов принимают непосредственное участие в их активации и пролиферации. От стационарного уровня липидов зависит нормальное течение иммунологических реакций.

Изучение этих взаимосвязей и закономерностей является важным в раскрытии тонких механизмов развития иммунодефицитов с позиции молекулярных повреждений мембран иммунокомпетентных органов и клеток на фоне патологического процесса.

Материалы иметоды исследования

Исследования проводились на крысах породы ''Вистар'' массой 120–180 г., содержавшихся в стандартных условиях вивария. Забой животных проводили путём декапитации.

Для биохимических исследований использовали печень, селезёнку, костный мозг, тимус. Из суспензии этих органов выделяли лимфоциты на градиенте фиколверографин (6). Экстракцию липидов производили по методу Фольча (7).

Содержание общих ФЛ определяли по количеству неорганического фосфора (V. E. Vaskovsky (8)), а их фракции методом тонкослойной хроматографии. Идентификацию проводили с помощью цветных реакций и свидетелей.

Результаты исследований

Изучение индивидуальных ФЛ в экстрактах липидов из тканей печени, тимуса, костного мозга, селезёнки крыс (табл.1) выявило отсутствие в них качественных различий. В то же время выявлено различие в количественном составе некоторых фракций ФЛ. В ткани печени общее содержание ФЛ превышает таковые значения тканей костного мозга, селезёнки и тимуса в 1,5–2,0 раза. По содержанию общих ФЛ органы располагаются в следующем порядке: печень, селезёнка, тимус, костный мозг. Наибольшее содержание ФЛ приходится на долю ФХ (43–50 %) и на ФЛ (22–28 %), а низкое содержание фракции ФК (0,6–2,0 %)

Соотношение нейтральных ФЛ /кислым ФЛ и ФХ/СФМ в печени составило 4,0–5,5; в костном мозге 3,76–3,8; в селезёнке 3,2–4,3; в тимусе 3,5–11,2 соответственно. Эти показатели информативны и свидетельствуют о глубине поражения мембраны, о степени целостности её, о доминировании процессов деградации над биосинтетическими.

Учитывая, что одним из ответственных за иммунитет организма являются лимфоциты, ФЛ принимают непосредственное участие в активации и пролиферации лимфоцитов и значит, изучение фосфолипидного состава последнего имеет важное значение. Изменение ФЛ мембран лимфоцитов может способствовать развитию иммунодефицитов. Поэтому, нами изучен индивидуальный состав ФЛ лимфоцитов, выделенных из органов иммунной системы и периферической крови здоровых животных. Зная нормальные параметры состава индивидуальных ФЛ мембран лимфоцитов и их изменения при различных формах воздействия можно раскрыть тонкие молекулярные механизмы иммунных нарушений. В табл. 2 представлены результаты исследований ФЛ состава лимфоцитов крови и органов иммунной системы крыс. В лимфоцитах крови содержание общих ФЛ значительно больше, чем лимфоцитов, выделенных из органов иммунной системы. Сравнительный анализ содержания индивидуальных ФЛ в экстракте липидов органов и лимфоцитов, выделенных из этих органов, показал, что в ткани костного мозга в 2,6 раза больше содержится СФМ, чем в его лимфоцитах. А в лимфоцитах костного мозга в 1,5 раза больше ФС и в 8 раз ФК, но в 2,0–2,5 раза меньше КЛ и ФИ. Существуют некоторые количественные отличия в составе индивидуальных ФЛ между органами иммунной системы (тимус, селезёнка, костный мозг, печень) и их лимфоцитами. Таким образом, изучение нормального содержания индивидуальных и общих ФЛ тимуса, селезёнки, костного мозга, печени и в лимфоцитах, выделенных из этих органов показало отсутствие качественных и наличие некоторых количественных перераспределений в составе ФЛ. Установленные показатели индивидуальных ФЛ в мембранах иммунокомпетентных органов и клеток имеет большое значение в понимании тонких молекулярных механизмов развития иммунных нарушений и в разработке новых методов их коррекции.

Таблица 1

Содержание индивидуальных фосфолипидов ворганах крыс (в процентах от общих фосфолипидов врасчете на г. сырой ткани п=10)

ФЛ	Печень	Костный мозг	Селезенка	Тимус
СФМ	7,8±0,3*	11,7±0,75*	10,2±1,75**	4,46±0,25
ФХ	43,1±2,1	44,3±2,55	43,5±3,5	50,6±3,2*
ФЭ	28,5±1,45	22,9±2,1	22,2±2,1	23,2±2,3
ФС	3,7±0,25**	5,6±0,45*	6,8±0,28	4,95±0,35
ФИ	7,3±0,45	7,8±0,85	6,9±0,58	9,1±0,78*
КЛ	6,48±0,56	5,9±0,42	5,95±0,42	4,75±0,54
ФК	1,26±0,2*	0,63±0,12*	2,0±0,1	0,8±0,25*
ЛФХ	1,9±0,15*	1,1±0,2*	2,4±0,16	2,15±0,08*
Сумма н. Р. в мкг	1078,8±26,5	507,6±19,1	710,3±28,4	513,5±19,5
Соотн. нейт./кисл.	4,0	3,76	3,2	3,5
Соотн. ФХ/СФМ	5,5	3,8	4,3	11,2

* — Р 0,01–0,001

** — Р 0,1–0,2

Таблица 2

Содержание индивидуальных фосфолипидов лимфоцитов крови иорганов иммунной системы крыс внорме (в процентах от общих фосфолипидов врасчете на 106 лимфоцитов) п=10

ФЛ	Лимфоциты
Крови	Селезенки	Тимуса	Кост. мозга
СФМ	7,95±0,81*	6,6±0,4**	6,1±0,33**	5,9±0,3**
ФХ	45,5±2,3	45,7±1,5	46,9±2,94	43,5±2,4
ФЭ	28,5±1,3	26,6±1,3	28,2±1,9	25,5±1,25
ФС	5,9±0,55	5,1±0,78	5,3±0,44	8,2±0,38**
ФИ	6,85±0,44*	6,0±0,6	5,7±0,5	6,3±0,4
КЛ	2,35±0,38	1,75±0,25	1,9±0,4	2,2±0,38
ФК	1,6±0,2*	6,5±0,42**	4,6±0,7**	7,5±0,75**
ЛФХ	1,4±0,15	1,2±0,18	1,3±0,25	0,9±012**
Сумма н. Р. в мкг	524,4±10,7*	428,0±13,5	316,2±19,8	272,3±8,5**
Соотн. нейт./кисл.	4,6	3,8	4,3	3,0
Соотн. ФХ/СФМ	5,7	6,9	7,8	7,3

*,** Р 0,02–0,001

Литература:

1. Исмагилова Е. Ю. Влияние различной обеспеченности крыс витамином Е и полиненасыщенными жирными кислотами на антителообразующую функцию спленоцидов. /Матер. III Всесоюзн. Конф. М.-1989, Т-2, с 42–43.
2. Брейдо В. В. и др. Перекисное окисление липидов и повреждение печени при острой алкогольной интоксикации. / Вопросы кардиологии. — 1991- № 2 — с 2–4.
3. Антипов.А. В. Тюрин В. А. и др. Молекулярные механизмы стабилизации токоферолом моноаминооксидазы мозга при свободнорадикальном окислении липидов. // Свободные радикалы и биостабилизаторы. Матер. I Болгаро — Советского симпозиума — София. –1987. А.с. стр 250–252.
4. Петяев И. И. Ларин А. С. и др. Роль свободнорадикальных процессов и антиоксдантов в регуляции антителообразования. // Матер. III Всесоюзн. конф.'' Биоантиоксидант'' М. — 1989 — т.2 — с 24–25.
5. Машковский Ю. Ш. Татьяненко В. Л. Встраивание синтетических фосфолипидов в мембраны саркоплазматического ретикулума. // Молек. биология. — 1983 т.17 вып. 2. С 410–417.
6. Ковалёв И. Е. Палевая О. Ю. Биохимические основы иммунитета к низкомолекулярным химическим соединениям. М.:Наукаб — 1985, 303с.
7. Folch J. V. Stoane — Stanley G. H. A simple method for isolation and purification of total lipids from animal tissues. // J. Biol. Chem. 1957. — Vol. 226. — p.497–509
8. Voslovsky V. E. Kostetsky E. U., Vasendin J. M. A universal reagent for phospholipid analisis. // J. Chromatogr. — 1975. — Vol. 114. — p. 129–141
9. Алматов К. Т. и др. Изменение фосфолипидного состава и окислительного фосфорилирования в митохондриях при гепатите. Вопросы мед. химии.- 1986 — т.32 — № 3.- стр. 27–30
10. Гульский Ю. И. Молекулярные повреждения мембран гепатоцитов при экспериментальном поражении печени. Автореф. дис. докт. наук. — Киев — 1983 — стр. 5