Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия (литературный обзор)



Известно, что тромбоциты — это форменные элементы крови, которые принимают непосредственное активное участие в процессах гемостаза. Однако, помимо этого, тромбоциты также оказывают влияние и на клетки иммунной системы. Одним из примеров такого влияния является лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия (ЛТА) [3].

В данном литературном обзоре рассмотрены последние современные литературные данные об этом феномене, его механизме, условиях, а также методика лабораторного определения показателя ЛТА.

Ключевые слова: лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия, показатель ЛТА, иммунитет.

Цель: проанализировать современные данные литературы об феномене лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии, о механизме и необходимых условиях, а также изучить предлагаемые методики определения показателя ЛТА.

Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия (ЛТА) — это способность лимфоцитов с маркерами СD3+, CD4+ (Т-хелперы), CD16+ (натуральные киллеры — NK-клетки), образовывать коагреганты с тромбоцитами с помощью адгезивных молекул, которые позволяют лимфоцитам закрепляться на поврежденном эндотелии и мигрировать внутрь повреждённого участка сосудистой стенки. Этот показатель является интегральным и единовременно отображает изменения как в системе гемостаза и в системе иммунитета [7].

В момент нарушения целостности сосудистого эндотелия затрудняется экспрессия большинства известных молекул адгезии для лимфоцитов. В следствие этого нарушаются кооперация и миграция иммунных клеток в зоне повреждения стенки сосуда [1]. Феномен ЛТА компенсирует неспособность лимфоцитов в отсутствии молекул адгезии мигрировать в участок повреждения и зафиксироваться там.

Модель участия тромбоцитов в миграции лимфоцитов в участки сосудистого повреждения можно представить следующим образом [1]:

В момент повреждения целостности сосудистой стенки нарушена кооперация и миграция лимфоцитов в зону повреждения из-за затруднения экспрессии эндотелием сосуда молекул адгезии. Активированные тромбоциты способствуют контакту лимфоцита и коллагеновых волокон, тем самым облегчая их взаимодействие с молекулами межклеточной адгезии ICAM-1. Дальнейшая ретракция тромбоцитов способствует локомоции лимфоцитов вглубь поврежденного участка. Кроме того, тромбоциты частично компенсируют недостающую антигенпрезентирующую функцию и одновременно с этим снижают реакцию лимфоцитов на коллагеновые волокна как на антиген [6]. Также осуществляют трофическую и репаративную функции, секретируя тромбоцитарный фактора роста. Помимо молекул ICAM-1 адгезии на экстрацелюлярном матриксе способствуют интегриновые и неинтегриновые мостики, такие как _IIb/3 и ₁-связанные интегрины, Р-селектин-PSGL и CD40-CD40L [6].

Регуляция ЛТА осуществляется за счет действия различных биологически активных веществ: индукторов агрегации тромбоцитов, цитокинов, молекул адгезии. В опубликованных результатах исследований было отмечено, что IL2 является индуктором взаимодействия тромбоцитов и лимфоцитов с маркерами CD4+ и CD16+. Выяснено, что после инкубирования лимфоцитов с IL2 число лейкоцитарно-тромбоцитарных агрегатов повышалось более чем в 4 раза [1]. А инкубация лимфоцитов с моноклональными антителами против IL2 практически полностью устраняет способность образовывать лимфоцитарно-тромбоцитарные агреганты для NK-клеток и значительно тормозит эту функцию у Т-хелперов [2]. Установлено, что кроме IL2 оказывают влияние на адгезию и другие цитокины. Например, инкубация цельной крови в присутствии IL-1β в 2,5 раза повышала число лимфоцитарно-тромбоцитарных коагрегатов [1]. А противовоспалительные цитокины, такие как IL4, IL10, а также IFNγ существенно ингибируют лимфоцитарно-тромбоцитарную адгезию [2].

Установлено, что при предварительной инкубации лейкоцитов с моноклональными антителами против ICAM-1 — молекулы адгезии быстрого реагирования практически полностью устраняла способность лейкоцитов спонтанно вступать в контакт с кровяными пластинками. Внесение в среду роста лейкоцитов IL-2 при этом не повышало адгезивную функцию инкубируемых клеток [1]. Кроме того, выявлено, что тромбоциты способствуют адгезии в условиях тока, а не статики. И в большей степени в условиях тока с высокой степенью напряженности сдвига [1]. Добавление АДФ, адреналина, коллагена, тромбина и фактора активации тромбоцитов увеличивало ЛТА в среднем в 1,5–2 раза [1].

На процесс ЛТА не влияют ионы кальция и гликопротеиды (GP) IIb/IIIa [1].

Методика определения показателя ЛТА.

Метод определения показателя ЛТА адгезии предложен Ю. А. Витковского и соавт. (1999). Свежую гепаринизированную кровь наслаивают на градиент урографин-фикол (плотностью 1,077) и выделяют лимфоциты. Собирают интерфазное кольцо, содержащие клетки и кровяные пластинки, однократно промывают фосфатно-солевым буфером с pH 7,4 и центрифугируют при 1000 об/мин в течение 3–4 мин. Надосадочную жидкость сливают, осадок микроскопируют в камере Горяева. Подсчитывают число лимфоцитарно-тромбоцитарных коагрегатов на 100 клеток. Степень адгезии определяют как число кровяных пластинок, адгезированых на поверхности одного лимфоцита [4].

Заключение

На сегодняшний день известен феномен лейкоцитарно-тромбоцитарной адгезии, разработана авторская методика определения показателя ЛТА. Известно, что ЛТА зависит как от функционального состояния тромбоцитов, так и от различных биологически активных молекул — индукторов агрегации: ICAM-1, IL-2, IL-1, IL-16. Дальнейшие исследования, направленные на изучения взаимосвязи показателя ЛТА с патологическими состояниями может привести валидации данного метода к применению в клинической практике с целью комплексной оценки как состояния системы гемостаза, так и иммунной системы.

Литература:

1. Белова Н. И., Воробьева Н. А. Современные методы лабораторной диагностики в иммунологии: иммуноферментный анализ, лимфоцитарно-тромбоцитарная агрегация и определение фагоцитарной активности // Учебно-методические рекомендации // Учебно-методические рекомендации. — 2014. — № . — С. Стр 47–52.
2. Витковский Ю. А., Кузник Б. И., Солпов А. В. Итоги 10-летнего иследования механизмов лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии // Забайкальский медицинский вестник. — 2008. — № 1. — С. 36–41.
3. Витковский Ю. А., Кузник Б. И., Солпов А. В. Патогенетическое значение лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии // Медицинская Иммунология. — 2006. — № 5–6. — С. 745–753.
4. Емельянова А. Н., Витковский Ю. А. Изменение лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии у больных рожей // Забайкальский медицинский вестник. — 2010. — № 2. — С. 14–17.
5. Любин А. В., Солпов А. В., Шаповалов К. Г.. Агрегация тромбоцитов и лимфоцитарнотромбоцитарная адгезия при электротравме в эксперименте // Альманах клинической медицины. — 2012. — № № 27’. — С. Стр 46–49.
6. Тополев И. Р., Лиханов В. В., Витковский Ю. А. Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия у спортсменов-пауэрлифтеров и бодибилдеров при максимальных и субмаксимальных нагрузках (предварительные исследования) // Забайкальский медицинский вестник. — 2005. — № 1. — С. 13–15.