Определение чувствительности Salmonella enteritidis (group D) к антибактериальным препаратам диско-диффузионным методом

Сальмонеллез — острое инфекционное зооантропонозное заболевание с фекально-оральным механизмом передачи, вызываемое Salmonella spp., характеризующееся симптомами общей интоксикации и поражением ЖКТ, в редких случаях развитием генерализованных форм.

Бактерии рода сальмонелла являются одной из основных причин ОКИ бактериальной этиологии у жителей как развивающихся, так и развитых стран, за короткое время в мире заболеваемость увеличилась в 6–10 раз. В большинстве стран сальмонеллы занимают первое — второе место в структуре инвазивных диарей [1].

Заболеваемость сальмонеллезом носит спорадический характер, но также регистрируются крупные пищевые, реже водные вспышки, очаги нозокомиальной инфекции (родильные дома, реанимационные отделения, отделения для детей раннего возраста) и вспышки в закрытых учреждениях (дома престарелых, психоневрологические интернаты). Наиболее высокая заболеваемость сальмонеллезом характерна для детей раннего и дошкольного возраста. Источником инфекции при сальмонеллезе являются животные и человек (больные и бактерионосители), причем большую опасность представляют животные бактериовыделители. Инфицирующая доза 105–108 микробных клеток. Иммунитет после перенесенной инфекции нестойкий (3–6 месяцев), сероспецефический.

Сальмонеллы, как грамотрицательные микроорганизмы, обладают природной чувствительностью к широкому спектру АБП: бета-лактамам (аминопенициллины, карбоксипенициллины, ингибиторзащищенные пенициллины, цефалоспорины, монобактамы, карбапенемы), аминогликозидам (стрептомицин, канамицин, гентамицин, тобрамицин, амикацин), хинолонам (налидиксовая кислота) и фторхинолонам (ципрофлоксацин, норфлоксацин, офлоксацин и др.), тетрациклинам (тетрациклин, доксициклин), полимиксинам, сульфаниламидам и ко-тримоксазолу, нитрофуранам (нифуроксазид, нифурантел, фуразолидон) и препаратам других групп (фосфомицину, хлорамфениколу) [2]. Поскольку в настоящее время отмечен неуклонный рост резистентности штаммов энтеробактерий к большинству препаратов, применяющихся для терапии инфекционных заболеваний, у выделенных возбудителей необходимо в обязательном порядке определять чувствительность к АБП не только с целью назначения адекватной этиотропной терапии, но и с целью осуществления мониторинга чувствительности к различным АБП.

Материалы и методы

Исследование проводили на базе лаборатории ООО НПФ Хеликс отдела микробиологии в период с февраля 2022 г. по май 2022 г. Первоначально для проведения исследования были получены 40 образцов чистой культуры Salmonella enteritidis (group D) от 40 пациентов с ОКИ в возрасте до 16 лет в соответствии с Методическими рекомендациями [3,4]. Далее проводилось определение чувствительности к выбранным АБ и статистическая обработка результатов [5].

На первом этапе исследования производили первичный посев биологического материала на плотные среды Эндо и XLD и среду обогащения Раппапорта. Через 24 часа отбирали колонии, подозрительные на сальмонеллы. Эти колонии в количестве 3–5 и более с каждой чашки пересевали на среду Олькеницкого. В лаборатории Хеликс для идентификации подозрительных колоний проводят постановку на масс-спектрометр Maldi Biotyper Microflex. В этот же день производили пересев со среды Раппапорта на среду XLD и инкубировали 24 часа при температуре 37℃.

Через 48 часов проводилась идентификация выделенных культур по морфологическим и культурально-биохимическим свойствам, изучение антигенной структуры выделенных культур в реакции агглютинации на стекле с монорецепторными сальмонеллезными сыворотками, просмотр чашек с посевами со сред обогащения и отбор подозрительных колоний.

Если выделенная культура обладала типичными для сальмонелл морфологическими, культуральными и биохимическими свойствами и давала четкие результаты в реакции агглютинации с определенными монорецепторными сыворотками, начиналось определение чувствительности сальмонеллы к антибиотикам. При выделении сальмонелл, отклоняющихся от типичной характеристики, проводились дополнительные исследования для окончательной идентификации и дальнейший подбор чувствительности.

Далее начинался второй этап исследования. Диско-диффузионный метод (ДДМ) определения чувствительности микроорганизмов к АБП основан на способности АБП диффундировать из пропитанных ими бумажных дисков в питательную среду, угнетая рост микроорганизмов, посеянных на поверхности агара [6]. Для исследования в качестве питательной среды использовали агар Мюллера-Хинтона собственного приготовления и диски со следующими антибиотиками: амикацин, цефотаксим, амоксициллин-клавулан, ампициллин-сульбактам, сульфаметоксазол-триметоприм, цефтибутен. При определении чувствительности ДДМ использовали стандартный инокулюм, соответствующий по плотности 0,5 по стандарту Мак-Фарланда и содержащий примерно 1,5x108 КОЕ/мл. Непосредственно после аппликации дисков чашки Петри помещали в термостат кверху дном и инкубировали при температуре 37°C в течение 24 часов. Учет результатов проводился с помощью анализатора чувствительности к антибиотикам ADAGIO. Результаты вносили в итоговую таблицу. Результаты измерения диаметров зоны подавления роста при определении чувствительности Salmonella enteritidis (group D) на агаре МХ представлены в табл. 1.

Результаты измерения диаметров зоны подавления роста при определении чувствительности Salmonella enteritidis (group D) на агаре МХ

Таблица 2

Критерии интерпретации результатов определения чувствительности диаметров зон подавления роста (мм) [7]

Результаты и обсуждения

Наибольшую чувствительность Salmonella enteritidis (group D) проявляет по отношению к амикацину, амоксициллину-клавулан и ампициллин-сульбактаму — 100 % образцов (табл. 3). Меньшее количество чувствительных образцов Salmonella enteritidis (group D) получено в отношении цефтибутена и цефотоксина (97,5 % и 95 % образцов соответственно). Максимальная резистентность Salmonella enteritidis (group D) зарегистрирована в отношении сульфаметоксазол-триметоприма (82,5 %).

Таблица 3

Результаты чувствительности Salmonella enteritidis (group D) к исследуемым АБП в количественном и процентном соотношении

Выводы

1. Salmonella enteritidis (group D) проявляет разную чувствительность к АБП.

2. Чувствительность Salmonella enteritidis (group D) к большинству рассмотренных АБП остается высокой (95–100 %).

Литература:

1. Лобзин Ю. В. Справочник по инфекционным болезням у детей. СПБ. 2013. 592 с.
2. Страчунский Л. С., Белоусов Ю. Б., Козлов С. Н. Практическое руководство по антиинфекционной химиотерапии. Смоленск. 2007. 464 с.
3. Методы контроля. Бактериологические и микробиологические факторы. Техника сбора и транспортировки биоматериала в микробиологические лаборатории. МУ 4.2.2039–05.
4. Методические указания по лабораторной диагностике, эпидемиологии и профилактике сальмонеллезов.
5. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. МУК 4.2.1890–04.
6. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам диско-диффузионным методом. Код 04-СОП26-МБЛ. Дата утверждения 19.09.2022.
7. Категорию чувствительности оценивали согласно рекомендациям EUCAST Версия 11.0. Действует с 01.01.2021.