Как показали экспериментальные данные, наибольшую адъювантную активность в отношении ротавируса проявляет низкомолекулярный хитозан.
Экспериментальные данные, представленные в таблице 2, свидетельствуют о том, что с наибольшим уровнем адъювантов оказались хитозана сукцинат и низкомолекулярный хитозан, титры антител к E. coli после применения в составе колибактериальной вакцины составили (ММ — 80 кДа, АСД — 87 %) [1, с. 30].
Как показали результаты исследований, сукцинат и низкомолекулярные формы хитозана в качестве адъюванта способны повышать иммунный ответ на вводимые антигены на 7,0 и 8,0 Log2 соответственно, что указывает на перспективность исследований. Продемонстрированные свойства хитозана позволяют предложить этот препарат в качестве вспомогательного средства при производстве отечественных вакцинных препаратов.
Ключевые слова: Хитозан, адъювант, титры антител, эшерихии, крупно рогатый скот, белые крысы.
The results obtained indicate that the greatest adjuvant activity against rotavirus is characteristic of low-molecular-weight chitosan.
As follows from the data presented in table. 2, titers of antibodies to E. coli after the use of various chitosan adjuvants in the colibacillosis vaccine were the highest with chitosan succinate and low molecular weight chitosan (MW — 80 kDa, SDA — 87 %).
The use of succinate and a low-molecular form of chitosan as an adjuvant makes it possible to obtain an immune response to introduced antigens at a level or higher than known oil and sorption adjuvants, which indicates the promise of research in this direction. The demonstrated properties of chitosan make it possible to propose this drug as an adjuvant in the production of domestic vaccine preparations.
Keywords: Chitosan, enterosorbent, antibody titers, Escherichia, cattle, white rats.
Препараты хитозана в последнее время становятся все более востребованными в ветеринарии и животноводстве. Хитозан в ветеринарии применяется в двух направлениях: наружно в качестве ранозаживляющего и внутренне как энтеросорбент, противовоспалительный и бактериостатический агент, а также возможно его инъекционное введение в составе лекарственных и вакцинных препаратов [1, c. 31].
Из существующего в настоящее время широкого ассортимента полимерных покрытий на раны и ожоги рассасывающиеся покрытия в наибольшей степени отвечают всем медико-биологическим требованиям [5, с. 21]. Хитозан и его производные регулируют пролиферацию фибробластов и стимулируют нормальную регенерацию кожи. Болеутоляющее и антимикробное действие хитозана обусловлено его уникальной способностью неспецифически взаимодействовать с болевыми рецепторами и клеточной стенкой микроорганизмов [2, c. 83].
Одной из причин эффективности хитозана при заживлении ран является его стимулирующее воздействие на иммунную систему: его можно рассматривать как аналог липополисахаридов клеточных стенок микроорганизмов, выполняющих роль активаторов макрофагов [1, с. 32].
Для лечения желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных применяются антибиотики, которые помимо антимикробного обладают иммунодепрессивным действием, а со временем у животных развивается резистентность к ним, и лечебный эффект теряется [3, c. 65].
Хитозан при применении внутрь обволакивает стенки слизистой кишечника, обладает способностью адсорбировать в желудочно-кишечном тракте токсины и способствует выведению их из организма животных, обладает бактериостатическим действием [2, с. 83]. Хитозановые препараты позволяют ускорить и удешевить курс лечения, исключить или значительно уменьшить использование антибиотиков и сульфаниламидов, обладающих кумулятивным эффектом [4, c. 20].
В последние годы учеными различных стран проведен цикл исследований по применению в качестве адъюванта хитозана и его модификатов в составе вакцин против листериоза, псевдомоноза, бруцеллеза, туберкулеза, ящура, гриппа и других инфекций [5, c. 20]. Известен положительный опыт применения нанохитозана для повышения иммунного ответа при конструировании бруцеллезных вакцин. Полученные результаты в большинстве случаев указывают на перспективность использования хитозана в иммунопрофилактике животных и человека [3, с. 64].
В опытах использовались препараты хитозан высокомолекулярный и низкомолекулярный, сукцинат и глутамат хитозана. Для проверки адъювантных свойств хитозана в отношении ротавируса и эшерихий крупного рогатого скота исследования проводились на белых крысах [2, с. 83]. Накопление ротавирусов проводили на культуре клеток СПЭВ в среде Игла до титра 7,0 lg ТЦД 50/мл, эшерихии культивировали на мясопептонном агаре до титра микробных тел 5 млрд/мл [1, с. 31]. После инактивации теотропином в культуральные жидкости с антигенами вносили хитозан различных препаративных форм до конечной концентрации 0,25 %, тщательно их перемешивали и вводили внутримышечно белым крысам в дозе 0,5 мл. Через 7 дней животных тотально обескровливали и в сыворотках крови определяли наличие антител к ротавирусу в РНГА, к эшерихиям — в РА [3, с. 64].
В таблице 1 приведены результаты определения титра антител к ротавирусной инфекции после введения подопытным животным производных форм хитозана.
Таблица 1
Результаты титра E . Coli K 88 антител к ротавирусу у крыс после использования различных адъювантов на основе хитозана
№ п/п |
Адъювант |
Титры антител к E . Coli K 88 |
|
Геометрический |
Log2 |
||
1 |
Хитозан глутомат |
1:32 |
5.0 |
2 |
Хитозан сукцинат |
1:32 |
5.0 |
3 |
Хитозан высокомолекулярный |
1:32 |
5.0 |
4 |
Хитозан низкомолекулярный |
1:128 |
7.0 |
5 |
Антиген(без адъюванта) |
1:8 |
3.0 |
6 |
Контроль |
1:2 |
1.0 |
Как показали экспериментальные данные, хитозан низкомолекулярный проявляет наибольшую адъювантную активность по отношению к ротавирусу.
Опытные данные свидетельствуют о том, что представленные в таблице 2, с самым высоким уровнем из адъювантов были сукцинат хитозана и низкомолекулярный хитозан, титры антител к E. coli после использования в составе колибактериозной вакцины составили (ММ — 80 кДа, СДА — 87 %) [1, с. 30].
Таблица 2
Результаты титра E . Coli А20 антител к ротавирусу у крыс после использования различных адъювантов на основе хитозана
№ п/п |
Адъювант |
Титры антител к E . Coli A 20 |
|
Геометрический |
Log2 |
||
1 |
Хитозан глутомат |
1:64 |
6.0 |
2 |
Хитозан сукцинат |
1:128 |
7.0 |
3 |
Хитозан высокомолекулярный |
1:32 |
5.0 |
4 |
Хитозан низкомолекулярный |
1:259 |
8.0 |
5 |
Антиген (без адъюванта) |
1:2 |
1.0 |
6 |
Контроль |
0 |
0 |
Выводы
Как показали результаты исследований, сукцинат и низкомолекулярная форма хитозана в качестве адъюванта позволяют повысить иммунный ответ на вводимые антигены на 7.0 и 8.0 Log2 соответственно, что указывает на перспективность исследований. Проявленные свойства хитозана позволяют предложить этот препарат в качестве адъюванта в производстве отечественных вакцинных препаратов.
Литература:
- Адьювантная активность хитозана при конструировании вакцины против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота Мурадян Ж. Ю., Рогов Р. В., Пименов Н. В. Ветеринария, зоотехния и биотехнология. 2021.№ 6. С. 29–33.
- Изучение острой и субхронической токсичности белкового гидролизата Рогов Р. В., Мурадян Ж. Ю., Круглова Ю. С. Ветеринария, зоотехния и биотехнология. 2022. Т. 2.№ 12–2. С. 79–85.
- Мурадян, Ж.Ю., Влияние пробиотического препарата в комплексе с хитозаном на продуктивность молодняка крупного рогатого скота / Ж. Ю. Мурадян, Р. В. Рогов, И. Г. Рязанов // Ветеринария, зоотехния и биотехнология. -2021. -№ 5. –С. 63–67.
- Рогов Р. В. Применение препарата «Мастинол-форте» в терапии клинического мастита у дойных коров / Р. В. Рогов, Ю. С. Круглова., Ж. Ю. Мурадян / Ветеринария, зоотехния и биотехнология. 2021. № 12. С. 19–24.
- Рогов Р. В. Оценка эффективности железосодержащих препаратов в комплексной терапии антенатальной гипотрофии поросят /Р. В. Рогов., Ж. Ю. Мурадян., И. Г. Рязанов // Ветеринария, зоотехния и биотехнология. 2021. № 6. С. 13–17.