Химический состав и биохимические свойства листвы амаранта



В статье приведены сведения о химическом составе и биохимических свойствах листвы амаранта. Растение амарант рассматривается как богатый источник пищевых и биологически активных компонентов пищи: белка, аминокислот, пигментов, полифенольных соединений, гликозидов, алкалоидов, пектина и ряда других веществ. Представленный комплекс изоферментов амаранта, участвующих в основных метаболических процессах при онтогенезе, позволяет осуществлять эффективный биохимический анализ генетических маркерных признаков данного растения с целью выявления его полиформизма при интродукции и акклиматизации.

Ключевые слова: амарант, листва, химический состав, биологически активные вещества, изоферменты.

The article provides information on the chemical composition and biochemical properties of amaranth foliage. The amaranth plant is considered as a rich source of food and biologically active components of food: protein, amino acids , pigments, polyphenolic compounds, glycosides, alkaloids, pectin and a number of other substances. The presented complex of amaranth isoenzymes involved in the main metabolic processes during ontogenesis allows for an effective biochemical analysis of the genetic marker signs of this plant in order to identify its polyformism during introduction and acclimatization .

Keywords : amaranth, foliage, chemical composition, biologically active substances, isoenzymes .

В предыдущей работе [1] авторы отмечали, что «…здоровье человека непосредственно связано с пищей, которую он ежедневно употребляет. Для его нормальной жизнедеятельности огромное значение имеет правильное питание, создающее необходимые условия для оптимального самочувствия, поддержания хорошего здоровья и работоспособности организма человека. Нарастающая индустриализация и научно-технический прогресс цивилизации человечества с точки зрения медицины уже не оцениваются как исключительно прогрессивное явление. Наряду с неблагоприятным воздействием техногенных и антропогенных факторов на первый план выходит недостаточное потребление человеком натуральных пищевых компонентов, что приводит к нарушению обмена веществ и многочисленным заболеваниям. При таком качестве питания население развитых стран, в том числе и России, начинает деградировать как в плане естественного сокращения численности, так и ухудшения генофонда…».

В том же источнике отмечается уникальность и ценность такой продовольственной культуры как амарант. Амарант ( Amaranthus ) — это ценная техническая, кормовая, пищевая (зерновая и овощная) и лекарственная культура, что в переводе с греческого означает «бессмертный». В доколумбовые времена амарант был одной из основных пищевых культур Нового Света, почти такой же важной, как кукуруза и фасоль. Древние ацтеки считали, что употребление семян амаранта в пищу укрепляет тело и дух. Помимо употребления в пищу, ацтеки использовали листья амаранта как источник пурпурной краски для языческих обрядов.

В настоящее время листовая часть амаранта рассматривается как богатый источник пищевых и биологически активных компонентов пищи: белка, аминокислот, пигментов, полифенольных соединений, гликозидов, алкалоидов, пектина и ряда других полезных веществ. Высокий белковый потенциал фитомассы амаранта был отмечен зарубежными исследователями еще в конце 70-тых годов XX века. Так, максимальная величина накопления белка в молодых листьях амаранта достигает 29,0 % ( A. gangeticus ), зависящая от вида, сорта и фазы развития растения, природно-климатических условий возделывания и применяющейся агротехнологии [2].

С другой стороны, в большей степени содержание белка в листьях амаранта зависит от стадии развития и уменьшается с увеличением возраста растений (от 13,9–22,6 % при прорастании, до 11,0–20,9 % в фазу цветения) [3]. Содержание сырого протеина в листовой массе различных видов амаранта также сильно варьирует (14,4–29,1 % в пересчете на абсолютно сухое вещество) (табл. 1).

Анализ фракционного состава показывает, что в белке листвы амаранта на долю водо- и солерастворимых фракций (альбуминов и глобулинов) приходится достаточно большое количество белка (14,7–33,7 %) [2], состоящего из 18 аминокислот. Белок зеленой части амаранта содержит большое количество лейцина (5,0–7,7 %), лизина (4,3–5,7 %) и фенилаланина (4,2–6,6 %). Из заменимых аминокислот белка амаранта преобладают глютаминовая и аспарагиновая кислоты, аргинин [4]. Кроме того, в листве амаранта ( A. cruentus ) обнаружен низкомолекулярный белок (8 кДа), проявляющий свойства ингибитора трипсина, слабо ингибирующего химотрипсин и не воздействующий на субтилин [5].

Таблица 1

Содержание белков в зеленой массе амаранта (фаза бутонизации) [6]

Видовая форма или сортообразец	Фракционный состав белка, % от сырого протеина				Сырой протеин, % от абсолютно сухое вещество
	альбу-мины	глобу-лины	глюте-лины	прола-мины
A. aureus K-117	19,4	25,3	36,9	18,4	16,5
A. caudatus K-23	21,4	15,6	43,4	19,6	17,4
A. caudatus K-87	18,1	22,4	41,8	17,7	15,1
A. caudatus K-99	20,1	21,4	32,0	26,5	24,5
A. caudatus K-124	16,2	20,4	31,7	31,7	21,4
A. caudatus K-125	29,3	21,6	36,4	12,7	19,8
A. caudatus vr 238	25,4	21,9	30,4	22,3	15,1
A. cruentus ECO-2217	33,7	20,4	30,8	15,1	28,0
A. dubins K-86	21,7	24,4	25,7	28,3	16,0
A. gangeticus K-29	18,4	22,5	35,5	23,6	21,5
A. gangeticus K-76	14,7	22,4	37,4	25,5	19,5
A. gangeticus K-76	28,8	29,8	29,5	11,9	15,8
A. gangeticus K-104	18,9	29,4	27,7	24,0	29,1
A. hypochondriacus	20,2	24,1	29,2	26,6	22,4
A. K-9 местный	18,9	24,0	35,5	21,6	18,3
A. кр. Конго, K-111	29,9	18,5	29,8	22,6	19,9
A. speciest (vr 366)	25,1	22,8	33,1	19,0	18,5
A. tricolor K-99	18,4	19,9	39,1	22,6	18,0
A. tricolor K-113	22,3	26,7	39,5	11,5	14,4
A. tricolor K-142	19,9	24,7	44,6	10,8	18,8

В листве амаранта обнаружены липиды в количестве от 1,0 до 3,8 % в пересчете на сухое вещество, при этом наибольшим содержанием липидов отличаются виды амаранта: A. caudatus , A. angustifolius , A. blitum , A. hybridus , A. mangostanus , A. oleraceus и A. viridis . Нейтральные липиды в листве амаранта составляют 53,6 % от суммы общих липидов, гликолипиды ‒ 33,8 %, фосфолипиды ‒ 12,6 %. Кроме того, в липидах листьев было идентифицировано до 11 жирных кислот, из которых основными являются линолевая (49,0 %), линоленовая (42,0 %) и пальмитиновая (18,0–25,0 %) кислоты [7].

Среди неомыляемых веществ липидов листвы амаранта выделяют стерины — ациклические вещества, входящие в группу стероидов, и представляющие собой кристаллические одноатомные спирты (стеролы). В виде сложных комплексов с белками они входят в состав протоплазмы и мембран, регулируя обмен веществ в клетке [8]. Так, содержание стеринов в листве амаранта достигает до 0,034 % в пересчете на сухое вещество, из них на 7-спинастерин приходится 46,0–76,0 % от общей суммы стеринов, на 7-стигмастерин − 11,0–24,0 % [7]. К тому же, листва амаранта содержит большое количество и каротиноидов (β-каротин, лютеин, виолаксантин, неоксантин и ксантофилл), соответственно ‒ от 3,93 до 9,96 мг/г (табл. 2) [2].

Таблица 2

Содержание биологически активных веществ в зеленой массе амаранта (фаза бутонизации), мг/г в пересчете на абсолютно сухое вещество

Видовая форма или сортообразец	Каротиноиды	Хлорофилл a	Хлорофилл b	Амарантин
A. aureus K-117	7,97	19,35	16,23	1,80
A. caudatus K-23	9,47	18,63	15,93	25,82
A. caudatus K-87	3,93	12,95	5,68	13,50
A. caudatus K-99	8,33	16,98	12,65	24,0
A. caudatus K-124	6,04	14,6	14,57	13,53
A. caudatus K-125	8,96	18,82	12,14	4,48
A. caudatus vr 238	5,73	15,89	8,23	3,60
A. cruentus ECO-2217	8,36	19,41	13,73	3,11
A. dubins K-86	6,53	16,34	9,77	3,49
A. gangeticus K-29	8,38	19,31	13,55	1,92
A. gangeticus K-76	6,21	19,53	16,59	4,77
A. gangeticus K-76	9,34	17,20	13,41	3,66
A. gangeticus K-104	8,37	14,58	13,67	4,62
A. hypochondriacus	8,70	16,53	15,83	39,7
A. K-9 местный	7,24	18,48	10,43	3,29
A. кр. Конго, K-111	8,95	15,17	12,38	13,07
A. speciest (vr 366)	9,96	18,09	10,26	1,47
A. tricolor K-99	8,21	17,57	12,06	35,93
A. tricolor K-113	9,44	18,02	12,18	4,22
A. tricolor K-142	7,33	21,35	14,30	4,15

Полагают, что из каротиноидов наибольшей биологической активностью обладает β-каротин, так как он содержит два β-иононовых кольца, из которых при гидролитическом распаде под действием фермента каротиндиоксигеназы образуются две молекулы витамина А. В свою очередь, благодаря наличию в молекуле двойных связей витамин А участвует в окислительно-восстановительных реакциях с образованием пероксидов, повышающих скорость окисления других соединений. Витамин А также влияет на барьерную функцию кожи, слизистых оболочек, проницаемость клеточных мембран и биосинтез их компонентов. Действие витамина А связывают с его вероятной причастностью к синтезу белка, в том числе в построении зрительного пигмента (родопсина) [9]. Адекватный уровень потребления бета-каротина — 5 мг в сутки [10].

К жирорастворимым пигментам также относят хлорофилл, придающий зеленую окраску растениям. Он имеет огромное значение при ассимиляции углекислого газа зеленым растением на свету в процессе фотосинтеза. Молекула хлорофилла содержит четыре соединенных между собой остатка пиррола, образующих порфириновое ядро, связанное с атомом магния. По своему строению хлорофилл весьма близок к дыхательным ферментам (пероксидазе, каталазе и цитохромоксидазе), а также к красящему веществу крови — гемму. Хлорофилл b отличается от хлорофилла a тем, что у второго пиррольного остатка вместо метильной группы содержится формильная группа. Адекватный уровень потребления хлорофилла — 100 мг в сутки. В листве амаранта разных видов в фазе бутонизации содержание хлорофилла a варьируется от 12,95 мг/г до 21,35 мг/г, хлорофилла b — от 5,68 мг/г до 16,59 мг/г (табл. 2) [6].

Наряду с белками, липидами и витаминами в листве амаранта содержатся различные вещества вторичного происхождения: фенольные соединения, органические кислоты, гликозиды, алкалоиды. Так, флавоноиды, относящиеся к многочисленной группе природных фенольных красителей, выступают в качестве донаторов водорода, целенаправленно подавляющих перекисное окисление липидов. Кроме того, они выполняют роль переносчиков хелатов, предотвращающих катализ свободно-радикальных реакций. Флавоноиды с Р-витаминным действием увеличивают упругость кровеносных капилляров и нормализуют их нарушенную проницаемость. Адекватный уровень потребления флавоноидов составляет 30 мг (в пересчете на рутин) в сутки.

В зелени амаранта обнаружены следующие флавоноиды (флавонолы, 3-О-глюкозиды): кверцетин, трифолин, рутин и витаминные вещества с Р-активностью в количестве до 7,0 % [7]. Из проростков A. cruentus были выделены фенолкарбоновые кислоты, проявляющие свойства активаторов ростовых процессов растений, в виде эфиров трех гидроксикоричных кислот ‒ кофейной, n -кумаровой и феруловой. Кофеизолимонная кислота составляет 85,0 % от общей суммы кислот, n -кумароилизолимонная кислота ‒ 7,0 %, ферулоизолимонная кислота ‒ 3,0 % [7, 8]. Адекватный уровень потребления гидрооксикоричных кислот — 10 мг в сутки [10].

Интерес к амаранту повышается и за счет содержания в нем алкалоидов, представляющих собой одну большую группу так называемых вторичных растительных метаболитов в виде азотистых гетероциклических соединений. В самом растении эти вещества воздействуют на субклеточные структуры (мембраны, цитоскелет), транспортную систему, рецепторы для эндогенных химических соединений и т. п., многие из них обладают важными фармакологическими свойствами.

Беталаины — единственные из алкалоидов, имеющие яркую окраску и окрашивающие листья, соцветия и плоды в интенсивно красно-фиолетовые, красные и контрастно-желтые цвета. Их подразделяют на две группы пигментов: бетацианины, дающие красно-фиолетовый пигмент, и бетаксантины, дающие желтый пигмент. К бетацианинам относят и амарантин, выделенный из листвы растений рода Amaranthus L .

Амарантин (С ₃₀ Н ₃₅ N ₂ O ₁₉ ) с молекулярной массой 727 Да, окрашивающий листья, соцветия и стебель растения в красно-фиолетовый цвет, представляет собой гликозид, агликоном которого является бетанидин, к которому в С ₅ положении присоединена глюкоза и глюкуроновая кислота. Молекула бетанидина содержит один ассиметричный атом (хиральный центр углерода С ₁₅ ) [11]. Отсюда, специфические свойства амарантина обусловлены наличием молекулы агликона с двойными сопряженными связями и двух реакционно-способных атомов азота в составе гетероциклического кольца, поэтому пигмент относят к алкалоидам. Амарантин содержится в различных формах: свободной (1,7 %), связанной с белком (2,7 %) или пектином (0,7 %).

Основным предшественником амарантина является L-тирозин, который образуется в хлоропластах в шикиматном пути биосинтеза вторичных соединений. Сам он в цис-форме способен воздействовать на ростовые процессы растения путем регулирования электрон-транспортных (энергетических) реакций в клетке, например, в хлоропластах и митохондриях [12]. Синтез амарантина обуславливает высокую адаптационную способность растения амарант к фотострессам за счет детоксикации активных форм кислорода и ингибирования свободно-радикальных реакций в клетках эпидермиса и мезофилла. Механизм антиокислительного действия амарантина заключается в ингибировании супероксид анион-радикала и свободных радикалов, образующихся при окислительном стрессе и образовании активных комплексов с ионами переменной валентности (железо, медь, цинк), которые катализируют свободно-радикальные реакции [11].

Амарантин хорошо растворяется в воде и метаноле, но не растворяется в ацетоне и эфире. Спектр поглощения амарантина характеризуется двумя максимумами: в УФ-области при 280 нм и зеленой области при 537 нм, поэтому его раствор имеет красно-фиолетовый цвет. Считается, что полоса при 537 нм в спектре обусловлена поглощением агликона. При рН 10 (щелочная среда) амарантин приобретает синий цвет, при рН 3 (кислая среда) красно-фиолетовая окраска переходит в желтый цвет [13].

Соответственно, содержание амарантина сильно различается у разных видов (табл. 2) и колеблется от 1,47 мг/г до 5,93 мг/г в пересчете на абсолютно сухое вещество [6].

Бетаксантин амаранта — желтый беталаиновый пигмент, который представляет собой азотсодержащее соединение, содержащее в своем составе кольцо пиррола и дигидропиридина. В отличие от бетацианинов, у бетаксантинов дигидроиндольное кольцо заменено аминогруппой или аминокислотой. Бетаксантин, так же как и амарантин, проявляет свойства антиоксиданта.

В листве амаранта также содержится пектин до 10,0 %, обладающий молекулярной массой 130 тыс. у.е. и степенью этерификации 75,0 %, что позволяет отнести его к группе высокоэтерифицированных пектинов. Он повышает концентрацию железа и низкомолекулярных липидов в сыворотке крови, восстанавливает действие дисахаридазы при повреждении слизистой оболочки кишечника, ингибирует развитие рака толстой кишки, а в комплексе с амарантином оказывает противовоспалительное действие [11]. Адекватный уровень потребления пектина — 2 г в сутки [10].

Подробно изучен состав летучих веществ, выделенных из листьев амаранта, обладающих аллопатическими свойствами. В надземной части A. raangostanus было обнаружено 56 летучих компонентов, среди них 15 спиртов, 5 эфиров, 13 альдегидов, 8 кетонов, 3 углеводорода, 9 кислот и 5 смешанных компонентов [7]. В листве амаранта накапливается большое количество аскорбиновой кислоты (42 мг %) [14], кальция (39,5 мг/г) и железа (28,7 мг %) [273] в пересчете на сухое вещество. В связи с этим, вегетативная часть амаранта может проявлять антагонистические свойства по отношению к спорообразующим бактериям Bacillus subtilis и неспорообразующим бактериям рода Pseudomonas и Esherichia , фунгицидную активность к микромицетам родов Aspergillus и Penicillium [16].

Кроме того, в различных популяциях амаранта обнаружен комплекс изоферментов, участвующих в основных метаболических процессах при онтогенезе растения: алкогольдегидрогеназа (К.Ф.1.1.1.1.), глутамат-дегидрогеназа (К.Ф.1.4.1.3.), малатдегидрогеназа (К.Ф.1.1.1.37), изоцитрат-дегидрогеназа (К.Ф.1.1.1.37) и малик-энзим (К.Ф.1.1.1.40) [17].

Данные ферменты относятся к классу дегидрогеназ, каталитирующих реакцию дегидрирования, то есть отнятия водорода от данного органического соединения, в клетках живых организмов они выполняют роль промежуточных переносчиков водорода. Так, алкогольдегидрогеназа дегидрирует этиловый спирт, глутамат-дегидрогеназа — глутаминовую кислоту, малатдегидрогеназа — яблочную кислоту, изоцитратдегидрогеназа — изолимонную кислоту, а малик-энзим (НАДФ-зависимая малатдегидрогеназа) катализирует легко обратимую реакцию образования яблочной кислоты из пировиноградной кислоты и углекислого газа [8].

Алкогольдегидрогеназа (АДГ) амаранта проявляется в зерне и проростках, а в ткани листьев индуцируется после 48-часового затопления. АДГ присутствует в клетках с анаэробным дыханием и при переходе к аэробному дыханию исчезает. Спектр АДГ имеет одну анодную зону ферментативной активности с быстро- или медленно-мигрирующими вариантами фермента. Быстромигрирующий вариант (FF) фермента широко распространен в популяциях разных видов амаранта, в то время как медленномигрирующий вариант (SS) редок. АДГ амаранта обладает димерной четвертичной структурой.

Глутаматдегидрогеназа (ГДГ) проявляет активность в зерне, проростках и листьях амаранта. Изоферментный спектр ГДГ представлен одной зоной активности, в которой имеются два типа спектров с одним вариантом фермента, но разной подвижностью (фенотипами FF и SS). Преобладает фенотип SS, а частота растений с фенотипом FF не превышает 1,0 %. Малатдегидрогеназа (МДГ) амаранта — мономер с четвертичной структурой, выявляется в зерне и проростках, имеет две анодные зоны активности: быстромигрирующую и медленную, в которой выявлены пять типов спектров: два — двуполосных (фенотипы FFFF и NNNN) и три — трехполосных (фенотипы FFFS, FFSS и FSSS).

Изоцитратдегидрогеназа (ИДГ) имеет две анодные зоны активности: быстромигрирующую и медленную. В обеих зонах встречаются два типа спектров с одной полосой активности, но разной подвижностью (фенотипы FF и SS). В популяциях разных видов амаранта выявляется быстромигрирующий фермент (фенотип FF) как в быстрой, так и медленной зоне, а фермент с медленной подвижностью (фенотип SS) встречается редко.

Малик-энзим (НАДФ-зависимая малатдегидрогеназа) проявляет активность в зерне, проростках и листве амаранта. Выделяются три зоны активности: быстрая, средняя и медленная. Быстрая зона диффузная, в средней зоне выявляются три однополостных спектра с быстрой (FF), средней (NN) и медленной (SS) подвижностью. Медленная зона мономорфна [17].

Максимальную активность перечисленные ферменты проявляют в фазе всходов и остаются активными в фазе бутонизации и, особенно, на этапе созревания зерна [18]. Применение изоферментного анализа популяций амаранта позволяет осуществлять эффективный биохимический анализ генетических маркерных признаков растения с целью выявления его полиформизма при интродукции и акклиматизации, что является актуальным, учитывая его большое видовое разнообразие [17].

Таким образом, приходим к выводу о необходимости проведения исследований в области изучения химического состава и биохимических свойств листвы амаранта с целью детального изучения содержащихся в ней биологически активных веществ, определяющих уникальность и безвредность амаранта как продовольственной культуры.

Литература:

1. Росляков Ю. Ф., Бочкова Л. К., Шмалько Н. А. Перспективы использования амаранта в пищевой индустрии // Известия вузов. Северо-Кавказский регион. Технические науки, 2004. ‒ № 4. — С. 92–95.
2. Чернов А. И., Куликов Ю. А., Гасимова Г. А. Особенности белков амаранта (Amaranthus L): экстракция, свойства, использование // Нетрадиционные природные ресурсы, инновационные технологии и продукты: Российская академия естественных наук, М., 2005. — Вып. 12. — С. 70–81.
3. Singhal B. K. Nutritive value of various amaranths and their industrial prospects in India // Amaranth: perspectives on production, processing and marketing. Minneapolis (Minn.), 1990. ‒ P. 181–184.
4. Содержание белка и его качественный состав у различных видов амаранта, произрастающих в БССР / В. И. Домаш, М. И. Ярошевич, Т. Я. Пелагейчик, С. А. Забрейко и др. // Возделывание и использование амаранта в СССР. ‒ Казань, 1991. ‒ С. 67–73.
5. Trypsin inhibitor from Amaranth ( Amaranthus cruentus ) leaves /E. V. Ievleva, Iu.A. Rudenskaia, A. V. Zimacheva, V. V. Mosolov // Prikl. biokhim. mikrobiol., 2000. — Vol.36.N.5. — P. 541–544.
6. Солодова Е. А. Разработка технологии комплексного получения белковых продуктов, обогащенных биологически активными веществами из листовой биомассы амаранта: автореф. дис. … канд. техн. наук. — М., 1998. — 26 с.
7. Коненков П. Ф., Гинс В. К., Гинс М. С. Амарант — перспективная культура XXI века. — 2-е изд., испр. и доп. ‒ М.: Изд-во РУДН, 1998. — 309 с.
8. Кретович В. Л. Биохимия растений. ‒ М.: Высшая школа,1986. ‒ 448 с.
9. Щербаков В. Г., Лобанов В. Г., Прудникова Т. Н., Минакова А. Д. Биохимия: учеб. для вузов /Под ред. Щербакова В. Г. — изд. 2-е, перераб. и доп. — СПб.: ГИОРД, 2003. — 440 с.
10. Рациональное питание. Рекомендуемые уровни потребления пищевых и биологически активных веществ // Методические рекомендации МР 2.3.1.1915–04. — М., приняты Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека с 02.07.2004 г.
11. Гинс М. С. Культура амаранта (род Amaranthus L.) как источник амарантина: его функциональная роль, биологическая активность и механизмы действия: дис... докт. биол. наук. — СПб., 2003. — 330 с.
12. Технология выращивания и переработки листовой массы амаранта как сырья для пищевой промышленности /П. Ф. Кононков, М. С. Гинс, В. К. Гинс, В. М. Рахимов. — М.: Рос. ин-тут дружбы народов, 2008. ‒ 195 с.
13. Шмалько Н. А., Росляков Ю. Ф. Амарант в пищевой промышленности. — Краснодар: Просвещение-Юг, 2011. — 489 с.
14. Prarash D., Joshi B. D., Pal M. Vitamin C in lеaves and seed oil composition of the amaranthus species // Int. j. food sci. and nutr., 1995. ‒ Vol.46. N1. — P.47–51.
15. Calcium analysis of selected Western African foods / I. Boukari, W. N. Shier, R. X. E. Fernandez, J. Frisch, B. A. Watkins et al // J. of food compos. and anal., 2000. ‒ Vol.13. N.3. — P. 37–42.
16. Гришакова И. В., Войно Л. И. Изучение антагонистических свойств препаратов из амаранта // Молодые ученые — пищевым и перерабатывающим отраслям АПК (технологические аспекты производства): тезисы докладов научно-практической конференции. ‒ М.: Издательский комплекс МГУПП, 2000. — С. 172–173.
17. Изозимная оценка генетической коллекции амаранта (Amaranthus L.) /Р. С. Юдина, Н. Б. Железнова, О. В. Захарова, А. В. Железнов, В. К. Шумный // Генет., 2005. — Т. 41. № 12. — С. 1681–1687.
18. Мирошниченко Л. А. Физиолого-биохимические аспекты онтогенеза амаранта (Amaranthus L.) при возделывании в Центрально-Черноземном регионе: автореф. дис. … канд. биол. наук. — Воронеж, 2008. — 21 с.