В статье приведены результаты бактериологических исследований объектов, а именно продовольственного сырья и кормов для животных, которые подлежат ветеринарному контролю, с целью индикации и изучения патогенных свойств бактерий рода Citrobacter. В результате анализа исследований установили, что частота выделения цитробактерий составляет 22,57 % от общего количества бактерий группы кишечной палочки, при этом 23,75 % цитробактерий обладали патогенными свойствами.
Ключeвые слова:Citrobacter, патогенные свойства, объекты ветеринарного контроля.
Высокий уровень защиты здоровья населения путем обеспечения гарантий безопасности сырья и пищевых продуктов для потребителей, как людей, так и животных, является одной из основных задач пищевого законодательства каждой страны. Вопрос повышения качества продуктов питания и кормов для животных всегда является актуальными. Согласно минимальному перечню, государственным стандартам Украины, а также техническим условиям на продовольственное сырье, продукты питания, и корма для животных, среди микробиологических показателей безопасности нормируются бактерии группы кишечной палочки, в том числе, и, бактерии рода Citrobacter.
За результатами исследований цитробактерии являются убиквитарными, то есть широко распространенными [1, 7]. Некоторые ученые относят их к нормофлоре кишечника, так как они нередко выделяются и у практически здоровых людей [1]. Эти микроорганизмы относятся к «опортунистическим» энтеробактериям и в подальшем могут иметь значение в патологическом процессе человека, животных и рыб. Некоторые серологические варианты этих бактерий могут вызвать спорадические случаи и вспышки заболеваний, протекающих по типу гастроэнтентеритов, диспепсий или пищевых токсикоинфекций (Рагинська В. П., 1969, 1973; Sedlak J., 1968).
Цитробактерии — мелкие палочки, размером 2–6 х 1,0 мкм, по Грамму негативные, в основном подвижные благодаря перетрихиальним жгутикам, спор и капсул не образуют, в мазках размещены парами и одиночно [1, 6, 7]. Факультативные анаэробы, хемоорганотрофы, обладают свойствами дыхательного и бродильного метаболизма [7]. Оптимальная температура их роста 370 С, рН-7,2. Хорошо растут на обычных питательных средах. Род Citrobacter объединен в группу ферментативно приближенных бактерий, которые связаны благодаря свойствам утилизировать цитрат и использовать его в качестве единственного источника углерода (citrus — лимон, bacter — мелкие палочки). Название этих бактерий предложили C. Werkman. G.Gillen (1932), а также И. Е. Минкевич (1948) [1, 6].
В литературных источниках ветеринарии мы не нашли данных касательно патогенных свойств цитробактерий, поэтому целью нашей научной работы было выделение из объэктов ветеринарного контроля бактерий рода Citrobacter и изучение их патогенных свойств, среди которых свойства продуцировать ДНК-азу, лецитиназу, гемолитические и вирулентные особенности.
В работе использованы результаты наших научных исследований пищевых продуктов, продовольственного сырья и корма для животных подлежащих ветеринарному контролю, проведенных в течение 2009–2013 годов.
Индикацию и идентификацию проводили в соответствии с общепринятыми методами бактериологических исследований [1, 2, 3, 5].
Всего исследовано 659 образцов. Из 452 проб изолировано бактерии группы кишечных палочек (БГКП). Среди выделенных БГКП к цитробактериям отнесли по культуральным и биохимическим свойствам 102 (22,57 %) культур из 98 (14,87 %) проб.
Подтверждённые изоляты рода Citrobacter исследовали на присутствие ДНК-азной, лецитиназной и гемолитической активности, а также изучали вирулентность на белых лабораторных мышах.
ДНК-азную активность проверяли путем высева чистой культуры опытных цитробактерий на мясопептонном агаре с дезоксирибонуклеиновой кислотой (ДНК спермы рыбы) и хлористым кальцием. В агаре вырезали асептически колодцы диаметром 5,0 мм, на расстоянии друг от друга 1,0 см. Суточные бульонные культуры цитробактерий вносили пипеткой по 1 капле в эти колодцы. Также, засевали полосками на поверхность ДНК-агара. Засеянные чашки помещали в термостат и инкубировали при 37 ± 1 °С в течение 18 и 24 ч, при этом периодически просматривали посевы. Лецитиназную активность определяли на питательном агаре с 1 % глюкозой и с желтком куриного яйца. Изолированные колонии суточных культур цитробактерий высевали штрихом бакпетлей на поверхность питательной среды, культивировали в течение 24–48 часов при температуре 37 ± 1°С. Гемолитические свойства цитробактерий определяли на питательном агаре с 5 % бараньей кровью. На чашку кровяной среды наносили культуры полосками. Культивировали посевы при температуре 37 ± 1 ° С в течение 24 час. Биопробу проводили введением внутрибрюшинно белым мышам в возрасте 14–18 дней, в дозе 0,5 млрд мк. кл. (0,5 см3) смывной жидкости с МПА.
На мясо — пептонном агаре с дезоксирибонуклеиновой кислотой, после добавления 3 % раствора соляной кислоты на колонии, у 48,88 % случаев появлялась прозрачная зона диаметром 5–7мм, что свидетельствовало о наличии ДНК — азы в культуре цитробактерии. Культуры цитробактерий на глюкозо — желточном агаре проявляли лецитиназную активность в виде прозрачного венца вокруг колонии у 38,33 % культур. При этом отметили, что за частую, лецитиназные свойства имели те культуры, которые обладали ДНК — азой.
43,75 % культур опытных бактерий рода Citrobacter проявляли неполное разрушение эритроцитов, то есть обладали α — гемолизом.
Гибель белых мышей наблюдали в течении 3 суток у 23,75 % случаев. При паталогоанатомическом вскрытии павших животных обнаружили вздутие желудка и частино кишечника.
В результате исследований установили, что при бактериологических исследованиях объектов (продовольственного сырья и кормов для животных), которые подлежат ветеринарному контролю, среди выделеных из них бактерий группы кишечных палочек встречаются бактерии рода Citrobacter в 22,57 %, из них патогенных — 23,75 %. Патогенные особенности полевых штаммов Citrobacter spp. выражались в ДНК-азной и лецитиназной активности в 48,88 % и 38,33 % соответственно, владели альфа-гемолизином — 43,75 % и вирулентностью на белых мышах — 23,75 % случав.
Литература:
1. Голубева И. В. Энтеробактерии / И. В. Голубева, В. А. Килесов, Б. С. Киселева // Руководство для врачей. — М.: Медицина, 1985. — 321 с.
2. Инструкция о порядке расследования учета и проведения лабораторных исследований в учереждениях санитарно-єпидемиологической службы при пищевых отравлениях № 1135–75. Москва, 1975.-130с.
3. Мікробіологія харчових продуктів і кормів для тварин. Горизонтальний метод виявлення Salmonella: ДСТУ EN 12824:2004. — [Чинний від 2005–07–01]. — К.: Держспоживстандрт України, 2005. -20с.
4. Ожердова Н. А. Особенности проявления цитробактериоза рыб. / монография; Ставрополь.: Агрус, 2007. — 100 с.
5. Определитель бактерий Берджи. Т.1. / Под ред. Дж. Хоулта, Н.Крича, П. Снита и др.-М.:Мир, 1997.-432с.
