Влияние экстракта Salix viminalis L. на показатели системы крови на фоне развития экспериментального хронического воспаления

Воспаление как основной типический патологический процесс, составляющий основу большинства заболеваний человека, является центральной проблемой медицины [4]. Значительный прогресс в лечении воспалительных процессов был достигнут благодаря внедрению в клинику современных противовоспалительных средств. При этом длительное применение флоголитических препаратов неизбежно связано с риском развития выраженных побочных явлений и осложнений. Поэтому поиск новых эффективных, малотоксичных, доступных для широкого круга населения лекарственных препаратов, способных регулировать течение воспалительного процесса, по-прежнему остается актуальной задачей фармакологии.

Известно, что антифлогистики растительного происхождения обладают достаточной активностью, низкой токсичностью, мягкостью действия и возможностью длительного использования с минимальным риском развития побочных эффектов [1, 9]. Перспективными растениями для создания новых противовоспалительных препаратов являются представители семейства ивовых (Salicaceae) [6]. Таким образом, целью настоящего исследования явилось изучить влияние экстракта из листьев ивы корзиночной на показатели системы крови в условиях развития хронического воспаления, обусловленного введением адъюванта Фрейнда.

Методы исследования

Объектом исследования явился комплексный сгущенный экстракт спиртовой из листьев ивы корзиночной (Salix viminalis L.), приготовленный согласно требованиям Государственной фармакопеи XI издания (1989) [3]. Эксперименты выполнены на беспородных крысах массой 200-250 г (первой категории, согласно сертификату), полученных из отдела экспериментальных биологических моделей НИИ фармакологии СО РАМН. Животных содержали в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей (Страсбург, 1986). Экстракт ивы корзиночной в дозе1 мл/кг, препарат сравнения кислоту ацетилсалициловую (КАС) в дозе 200 мг/кг начинали вводить внутрижелудочно за 24 часа до инокуляции адъюванта и продолжали применять далее ежедневно однократно на протяжении всего эксперимента. Контрольные животные получали в эквивалентном режиме воду очищенную. Хроническое иммунное воспаление инициировали полным адъювантом Фрейнда (взвесь БЦЖ в вазелиновом масле). Флогоген вводился крысам под плантарный апоневроз задней правой лапы однократно в дозе 0,1 мл [7]. Определение величины воспаленного сустава проводили с помощью плетизмометра. Выраженность воспалительного процесса оценивали по величине прироста (в процентах) отека больной конечности относительно объема здоровой лапы. Определение показателей костного мозга и периферической крови осуществляли стандартными гематологическими методами. Препараты для подсчета миелограмм готовили из ткани костного мозга, полученного из диафиза бедренной кости [2]. Статистическую обработку результатов проводили согласно t критерию Стьюдента [7].

Результаты исследования

Первичная (через 3 часа) воспалительная реакция на инокуляцию адъюванта у крыс контрольной группы проявлялась покраснением и значительным отеком конечности. Введение экстракта из листьев ивы подавляло развитие воспалительной реакции, значительно снижая объем воспаленной лапы, гиперемию и болезненность сустава, улучшая его подвижность по сравнению с контролем. Так, применение фитопрепарата подавляло развитие отека в 1,5−1,8 раза на 3−11-е сутки опыта и в 4−9,6 раза на 16−23-е сутки. Использование кислоты ацетилсалициловой снижало изучаемый показатель в данные сроки наблюдения соответственно в 1,9−2,5 раза и в 5,8−10 раз. При этом на 25-е сутки исследования данный показатель после применения растительного средства и препарата сравнения, в отличие от контроля, не отличался от нормальных значений.

Рис. 1. Влияние экстракта спиртового из листьев ивы корзиночной на прирост объема конечности у крыс после введения адъюванта Фрейнда. По оси абсцисс – сроки наблюдения, по оси ординат – прирост объема конечности.

* – различия достоверны в сравнении с контролем при Pt<0,05.

Известно, что при воспалении наблюдаются значительные изменения со стороны системы крови, отражая ее решающее значение в реализации воспалительной реакции [4]. Было показано, что в периферической крови у животных контрольной группы на 8 и 25-е сутки после введения адъюванта наблюдается значительное увеличение (на 37% и 22%) общего количества лейкоцитов за счет повышения содержания нейтрофильных гранулоцитов (8-е сутки) и лимфоцитов (8, 25-е сутки). Применение исследуемого растительного средства предотвращало развитие лейкоцитоза, оставляя показатели периферической крови на уровне интактных значений. Назначение синтетического противовоспалительного средства значительно уменьшало по сравнению с нормальными показателями общее число лейкоцитов в периферической крови на 25-е сутки наблюдения. Развитие лейкопении происходило за счет уменьшения количества лимфоцитов (на 36%), эозинофилов (на 64%) и моноцитов (на 38%) (рис. 2).

Рис. 2. Влияние экстракта спиртового из листьев ивы корзиночной на общее количество лейкоцитов (А) и число лимфоцитов (Б) в периферической крови у крыс на фоне развития адъювантной болезни. По оси абсцисс – сроки наблюдения, оси ординат – количество клеток.

* – различия достоверны в сравнении с контролем при Pt<0,05.

Для развития адъювантного артрита характерна продукция лимфоцитами лимфокинов, повреждающих мембрану эритроцитов, в результате чего развивается гемолитическая анемия [8]. Так, количество эритроцитов и ретикулоцитов в периферической крови у животных, не получавших флоголитической терапии, оказалось соответственно в 1,3−1,5 и 1,5−1,8 раза меньше, чем у здоровых крыс. Количество эритроцитов после назначения кислоты ацетилсалициловой снижалось (относительно нормы) в 1,2−1,7 раза, число ретикулоцитов − в 1,6−2 раза. Исследуемые данные у животных, которые получали экстракт ивы, существенно не отличались от такового в интактной группе (рис. 3).

Рис. 3. Влияние спиртового экстракта ивы корзиночной на количество эритроцитов (А) и ретикулоцитов (Б) в периферической крови у крыс на фоне развития адъювантной болезни. По оси абсцисс – сроки наблюдения, оси ординат – количество клеток.

* – различия достоверны в сравнении с контролем при Pt≤0,05.

Рис. 4. Влияние экстракта спиртового из листьев ивы корзиночной на общее количество кариоцитов (ОКК), число незрелых нейтрофильных гранулоцитов (ННГ), зрелых нейтрофильных гранулоцитов (ЗНГ), лимфоидных (Лф), эритроидных (Эр) и плазматических клеток (Пл) в костном мозге у крыс. По оси ординат – количество костномозговых нуклеаров.

* – различия достоверны в сравнении с контролем при Pt<0,05.

На фоне развития адъювантной болезни значительно изменялись показатели костного мозга. Так, у животных контрольной группы на 10% снижалось общее количество миелокариоцитов. Анализ миелограмм показал, что снижение клеточности костного мозга реализуется за счет снижения уровня зрелых нейтрофильных лейкоцитов (в 1,5 раза) и лимфоидных клеток (в 1,4 раза). Дефицит количества зрелых нейтрофильных гранулоцитов, необходимых для реализации противовоспалительной активности, в свою очередь на 31% активирует пролиферацию незрелых нейтрофильных гранулоцитов. Депрессия периферического звена эритрона закономерно приводила к гиперплазии (на 48%) эритроидного ростка кроветворения. Также у этих животных в 2,8 раза увеличивалось (относительно интактного уровня) число плазматических клеток. Известно, что плазматические клетки играют ведущую роль в развитии аутоиммунных процессов, продуцируя измененные агрегированные Jg G, которые, в свою очередь, распознаются иммунной системой как чужеродный антиген [5]. Картина костномозгового кроветворения после назначения кислоты ацетилсалициловой во многом была аналогична таковой у контрольных животных. Кроме того, использование данного противовоспалительного препарата приводило к уменьшению количества моноцитов (на 45%) и эозинофильных клеток (на 32%) по сравнению с нормальными значениями. Костномозговые показатели после введения экстракта ивы существенно не отличались от такового у здоровых крыс (рис. 4).

Таким образом, применение экстракта из листьев ивы корзиночной существенно подавляет развитие воспалительного отека конечности на фоне развития адъювантной болезни и, в отличие от синтетического противовоспалительного препарата, нормализует показатели центрального и периферического отделов системы крови у экспериментальных животных.

Литература:

1. Барнаулов О.Д. Введение в фитотерапию. − СПб.: «Лань», 1999. − 160 с.

2. Гольдберг Е.Д., Дыгай А.М., Шахов В.П. Методы культуры ткани в гематологии. − Томск, 1992. − 264 с.

3. Государственная фармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. – XI изд. – М.: Медицина, 1989. – 400 с.

4. Дыгай А.М., Клименко Н.А. Воспаление и гемопоэз. − Томск, 1992. − 276 с.

5. Клиническая иммунология и аллергология // Под ред. Л. Йегера. − М., 1990. − 296 с.

6. Минаева В.Г. Лекарственные растения Сибири. − Новосибирск: Наука, 1991. − 428 с.

7. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под общ. ред. Р.У. Хабриева – М.: Медицина, 2005. – 832 с.

8. Саратиков А.С., Венгеровский А.И., Прищеп Т.П. Адъювантная болезнь (морфология, патогенез, экспериментальная терапия. − Томск, 1983. − 104 с.

9. Соколов С.Я. Фитотерапия и фитофармакология. – М., 2000. – 976 с.