Изучение адаптационных свойств микроорганизмов к условиям внешней среды



В данной работе автор изучает адаптационные свойства микроорганизмов под влиянием неблагоприятных свойств внешней среды.

Ключевые слова : адаптация, устойчивость, золотистый стафилококк, резистентность, антимикробный препарат, антисептик.

Введение

Адаптация — одна из древнейших возможностей живых организмов. В основе адаптации лежит приобретение определенных навыков или признаков под действием неблагоприятных условий внешней среды. Приобретенные навыки помогали выживать не только отдельным организмам, но и человечеству в целом.

Принято считать, что человек — это «венец эволюции», непобедимый и всемогущий, но это не так!

В настоящее время бытует мнение, что появление адаптивных навыков у живых организмов отсутствует. Но это заблуждение. Достаточно обратить наш взор в микромир, где царствуют бактерии, вирусы, грибы, простейшие; где, как и миллионы лет назад царят законы сильнейшего; где, как и прежде, происходит адаптация микроорганизмов к изменяющемся условиям существования, основной целью которой является выживание. И микроорганизмы с этим отлично справляются: появляются бактерии, которые не чувствительны к антимикробным средствам и антисептикам. Появление таких микробов сопряжено с крайне тяжелым течением заболевания и повышением летальности.

По мнению многих ученых, способность микроорганизмов максимально быстро адаптироваться к неблагоприятным условиям среды — это залог успеха в борьбе за выживание. И человек на данном этапе эту войну проигрывает!

Жизнь на Земле, ее красота, разнообразие животной и растительной фауны, существует благодаря адаптационным механизмам, что тесно связано с теориями эволюции и приобретением новых признаков. Стремление живых организмов к выживанию и продолжению рода, определило пути и механизмы адаптационных процессов [1–3].

1.1. Теории появления адаптационных механизмов

1. Чарлз Дарвин

Теория основана на принципах естественного отбора (приобретенная приспособляемость), т. е. выживает сильнейший, кто успеет приспособиться к изменчивым условиям среды.

Пример: в холодных условиях выживает то животное, которое имеет более теплый мех [4].

2. Жан-Батист Ламарк

Теория основана на врождённой приспособляемости организмов к условиям обитания. Необходимый адаптационный признак вырабатывается в результате передачи по наследству. От поколения к поколению идет улучшение и усиление этого признака.

Пример: шерсть животных севера имеет более густую структуру: в одном фолликуле три волоска, по сравнению с мехом животных с теплым климатом [4, 5].

1.2. Виды адаптаций

1.2.1. Морфологическая адаптация — это изменения, в основе которых приобретаются внешние признаки: форма тела, окраска и др. [6–8].

А. Форма тела — адаптация для существования в водной или воздушной среде.

Пример: Перепонка на пальцах у водоплавающих птиц, форма тела у птиц (для полета и сопротивлению воздуха) и др.

Б. Изменение окраски — наиболее распространённая форма адаптации. Хамелеон при опасности изменяет цвет своей окраски в соответствии с фоном окружающей среды (мимикрия).

1.2.2. Физиологическая адаптация — это приобретение специальных признаков внутри самого организма. Изменение физиологических процессов, необходимых для выживания. Медведь накапливает жир на зиму.

1.2.3. Приспособительная адаптация — это вид поведенческой адаптации, когда живой организм своим поведением или действиями приспосабливается к определенным условиям существования. Белка запасает еду на зиму.

1.3. Уровни адаптации

1) субклеточный (усиление синтеза нуклеиновых кислот и белков, активация митохондриального аппарата клетки, как энергетической станции клетки).

2) клеточный

3) органный

4) системный

5) целостного организма

6) групповой

7) популяционный и др. [9–13].

1.3.1. Популяционная адаптация — это формирование адаптационных признаков у большой популяции живых организмов (люди, животные, растения), в определенной географической среде обитания. Проживание в экваториальной зоне обуславливает появление темного цвета кожи, курчавых волос.

1.3.2. Групповая адаптация — это выработка адаптационных механизмов, присущая группе организмов, которые полезны не только одному индивиду и группе, а популяции в целом. Пример: школьный класс, группа адаптируется к расписанию, занятиям, времени, и другим особенностям обитания в школе. Соблюдение этих правил (адаптационных механизмов) благоприятно отражается на всей популяции и школе в целом.

1.3.3. Адаптация организма в целом — это формирование определенных признаков характерных для целого организма. Например, находясь в жаркой среде, организм борется с перегревом, путем активизации потоотделения, расширения сосудов, подъема артериального давления и уменьшения темпа мочеотделения.

1.3.4. Органная адаптация — это приспосабливаемость того или иного органа к неблагоприятным условиям, как правило носит временный характер и встречается в экстренных ситуациях.

— Усиление кровотока к головному мозгу, почкам при травме

— Усиленная выработка эритроцитов при кровотечениях

1.3.5. Клеточная и внутриклеточная адаптация — это адаптация клетки к неблагоприятным условиям существования посредством использования внутриклеточных механизмов. Изучение данного вида адаптации позволило современным учены открыть многие жизненно важные процессы: [14–16].

— Регенерация (восстановление) клеток после травм и пожаров

— Трансплантация органов (почки, сердце, кожа)

— Изучение действия различных лекарств и препаратов

— Изучение течения различных болезней и т. д.

Для полного понимания процессов клеточной адаптации необходимо знать и понимать строение клетки, ее органелл и их основные функции.

1.4. Строение эукариотической клетки

Клетка имеет размер около 5 микрон (0.005 мм). Снаружи клетка окружена цитоплазматической мембраной. Внутри клетки расположено ядро и органеллы: митохондрии, рибосомы, лизосомы, центриоль и цитоплазматическая сеть. Органеллы клетки погружены в цитоплазму — это жидкая составляющая клетки [17, 18].

1. Ядро содержит молекулы ДНК, которые, группируясь, образуют хромосомы. В молекулах ДНК записана вся информация о человеке.
2. Митохондрии — энергетические станции нашей клетки. Чем больше митохондрий, тем больше энергии, тем активнее клетка живет. С возрастом количество митохондрий снижается, и клетки испытывают недостаток энергии, что приводит к их гибели.
3. Рибосомы — это фабрика по синтезу белка. Белок необходим для строения новых клеток и тканей.
4. Лизосомы — это шарики которые содержат ферменты необходимые для переваривания отходов жизнедеятельности клетки. Лизосомы выполняют как защитную, так и агрессивную функцию (повреждают соседние клетки), являясь источником развития заболеваний (панкреатит).
5. Цитоплазматическая сеть — это транспортная система клетки, которая представлена трубочками по всей площади клетки. По данной сети перемещаются питательные вещества, белки, вода, электролиты и др.
6. Центриоли — это два цилиндра расположенные перпендикулярно друг к другу. Основная их функция — это участие в делении клетки.
7. Цитоплазматическая мембрана — самая важная часть клетки, она уникальна и имеет сложное строение. Имеет двойной липидный слой (жиры) и белковый слой, который пронизывает мембрану клетки образуя рецепторы и каналы для транспорта веществ как во внутрь клетки, так и наружу.

1.5. Механизмы клеточной адаптации (основные пути)

Среди механизмов клеточной адаптации к неблагоприятным условиям окружающей среды можно рассмотреть несколько общепринятых вариантов [19, 20, 26, 27]:

— Образование клеткой специфического фермента, который разрушает агрессивные внешние факторы (токсины). Пример: образование бактериями специфических пенициллиназ (ферментов), которые разрушают антибиотики, в результате чего антимикробные препараты не действуют на бактериальную клетку.

— Перенос генов. Клетка которой удалось выжить при неблагоприятных условиях, передает информацию (нить ДНК) своей соседке, о том, что нужно сделать, чтобы также выжить.

— Укрепление цитоплазматической мембраны. Происходит в следствие уменьшения проницаемости (закрытие каналов) мембраны и токсины не поступают в клетку. Происходит образование специфической капсулы вокруг бактериальной клетки.

— Образование на своей мембране специфических рецепторов (обманок). Рецепторы на поверхности бактериальной клетки опознаются иммунной системой нашего организма как здоровая клетка. Таким образом, чужая клетка становится «невидимкой».

1.6. Источники, которые повышают адаптационную устойчивость микроорганизмов

Основными источниками, влияющими на адаптивную устойчивость микроорганизмов, можно считать [21–23]:

1. Сельское хозяйство — применение удобрений на полях (агрессивные химические вещества).
2. Животноводство — применение гормонов (стероидов) для роста животных
3. Промышленность — применение антибиотиков для хранения продуктов, производство красок, чистящих средств и т. д.
4. Медицина — применение химиопрепаратов и антисептиков в огромном количестве
5. Безграмотность населения — самолечение и бесконтрольное применение препаратов, химических веществ и пр.

1.7. Заключение

В течении последних десятилетий с развитием медицины, промышленности и других отраслей нашей жизни происходит увеличение клеточной (бактериальной) резистентности, что отмечается многими учеными всего мира. Данная адаптация не видна глазом, оценить ее масштабы затруднительно. Но приводимые данные о устойчивости (резистентности) бактерий к антимикробным препаратам поражают своей масштабностью и лавинообразным ростом.

Бесконтрольное применение химических препаратов, лекарств и других веществ ставит человечество на грань вымирания [19–23, 26, 27].

Цель работы:

Изучить формирование адаптационных механизмов бактериальной клетки на примере Staphylococcus aureus (золотистого стафилококка) под влиянием неблагоприятных факторов внешней среды (антибактериальный препарат и кожный антисептик).

Задачи исследования:

1. Определить вероятность формирования адаптивных механизмов (резистентности) у Staphylococcus aureus (золотистого стафилококка) под действием неблагоприятных факторов внешней среды (антибактериальный препарат и антисептик наружного действия).
2. Выявить время необходимое для формирования адаптивных механизмов у микроорганизма для каждой клинической (исследуемой) группы.
3. Выявить пути формирования адаптационных механизмов Staphylococcus aureus (золотистого стафилококка) в исследуемых группах, под влиянием неблагоприятных факторов внешней среды.

Объект исследования: Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк) как типичный и наиболее распространённый представитель мира бактерий.

Предмет исследования: Адаптационные свойства клетки под воздействием неблагоприятных факторов внешней среды.

Научная гипотеза: Под действием неблагоприятных факторов внешней среды, клетка приобретает новые признаки (свойства), которые помогают ей бороться и пережить эти агрессивные условия.

Материалы и методы исследования

Исследование выполнено в период 2021 по 2022 год и осуществлено с привлечением мощностей базы НПП «Эфферон» (Научный парк МГУ) и «ГКБ № 1 им. Н. И. Пирогова».

Исследование включало несколько этапов:

Первый этап (выделение микроорганизма) — была выделена чистая культура Staphylococcus aureus (золотистого стафилококка), путем взятия биологического материала смыва рук и носоглотки у исследователя (рисунок 1 и 2). Рост культуры осуществлялся на питательной среде желточно-солевого агара чашки Петри в течении 48 часов в термостате при температуре +37,0–37,1 *С (рисунок 3).

Рис. 1. Забор материала с рук исследователя	Рис. 2. Забор материала с носоглотки исследователя

Рис. 3. Рост культуры Staphylococcus aureus (золотистого стафилококка) в среде желточно-солевого агара

Для дополнительной идентификации (верификации) возбудителя выполняли микроскопию образца возбудителя с использованием микроскопа, подключенного к компьютеру. Окраска возбудителя проводилась типичным методом с окраской по Граму. Визуально определен возбудитель округлой формы синего цвета, располагающийся характерными скоплениями в виде «грозди винограда» (рисунок 4 и 5).

Рис. 4. Окраска возбудителя по Граму	Рис. 5. Визуализация возбудителя на микроскопе с использованием компьютера

Второй этап исследования (подготовка среды роста микроорганизма) — было подготовлено 16 бутылочек мясопептонного бульона заводского производства (ВС0102М) объемом 84 мл для аэробных культур.

Все 16 бутылок были разделены на 2 исследовательские группы:

Первая группа (8 бутылочек) — впитательную среду бульона внесен антибактериальный препарат «цефтриаксон» 2.0 грамма (что соответствует суточной дозе препарата) (рисунок 6). Бутылочки со средой маркированы по номерам от 1 до 8 (рисунок 7).

Рис. 6. Антимикробный препарат «Цефтриаксон»	Рис. 7. Внесение антимикробного препарата в среду для роста микроорганизма

Вторая группа (8 бутылочек) — питательные среды маркированы по номерам от 1 до 8. Далее в питательную среду бульона внесен антисептик наружного применения «Sanitelle» (рисунок 8) в объеме 0.5 мл (доза необходимая для разовой обработки рук) (рисунок 9).

Рис. 8. Антисептик наружного применения «Sanitelle»	Рис. 9. Внесение антисептика в среду для роста микроорганизма

Третий этап исследования (формирование адаптации/резистентности микроорганизма) — чистая культуру Staphylococcus aureus (золотистого стафилококка) в количестве 1 КОЕ (одна колониеобразующая единица) была помещена в мясопептонный бульон бутылочки № 1 (каждой исследуемой группы). Далее осуществлялся рост культуры в термостате в течении 48 часов.

По истечении времени бутылочку с питательной средой извлекали из термостата, отбирали 2 мл раствора с пророщенной культурой. Один мл раствора помещали в специальную кювету. Данную кювету помещали в прибор — спектрофотометр (рисунок 10) и определяли мутность раствора среды по количеству пропущенного луча света (рисунок 11).

Рис. 10. Аппарат для проведения прямой спектрофотомерии	Рис. 11. Принцип работы спектрофотомерии

Полученный результат измерения записывали в таблицу.

Второй мл пророщенной культуры заново высевали на питательную среду желточно-солевого агара чашки Петри и культивировали в термостате в течение 48 часов.

Далее пророщенную культуру, в количестве 1 КОЕ (одна колониеобразующая единица) вновь помещали в питательную среду, но уже в бутылочку № 2 (каждой группы) (рисунок 12). Процесс повторяли циклично в соответствии с графиком исследования с1 до 8 генерации бактерий (каждой клинической группы) (рисунок 13).

Рис. 12. Внесение культуры Staphylococcus aureus (золотистого стафилококка) в количестве 1 КОЕ в питательную среду для культивации возбудителя	Рис. 13. Пророщенные культуры Staphylococcus aureus (золотистого стафилококка) в питательной среде с 1 по 8 генерации бактерии

— Результаты измерений и полученные данные фиксировали в таблице.

— Клинико-лабораторное и микробиологическое исследование проводилось в течение 28–35 дней.

— Расходный материал, примененный в исследовании:

• Культура Staphylococcus aureus
• Чашки Петри с желточно-солевым агаром — 17 штук
• Мясо-пептонный бульон заводского производства (ВС0102М) — 18 бутылочек
• Петля для посева материала
• Спиртовая горелка
• Термостат
• Одноразовые кюветы для спектрофотометра — 18 штук
• Микроскоп
• Спектрофотометр
• Шприцы 5.0 мл — 52 штуки
• Стекла для проведения микроскопии мазков — 28 штук
• Краска для окраски препаратов по Граму — гематоксилин-эозин
• Антимикробный препарат — «цефтриаксон» (2.0 гр. 16 флаконов)
• Антисептик наружного действий: «Sanitelle» 8.0 мл. Состав: спирт этиловый 66.6 %, деионизированная вода, ПЕГ-12 диметикон пропиленгликоль, ПЕГ-14 М, ферол — А, отдушки.

— Схема исследования для каждой исследуемой группы

Рис. 14. Применение антимикробного препарата

Рис. 15. Применение антисептика наружного действия

— Статистическая обработка полученного материала и построение графиков проводилась в программе Excel.

Результаты собственных исследований

1. По результатам проведенного исследования в группе 1 (антимикробный препарат — цефтриаксон) мы наблюдаем незначительный и медленный рост формирования устойчивости Staphylococcus aureus (золотистого стафилококка) с 3 генерации (3 бутылочка), так как, повышается мутность раствора и увеличивается количество микроорганизмов в бульоне. Однако начиная с 5-ой генерации потомства, то есть с 5 бутылочки (16–20 сутки) идет скачкообразный рост устойчивости к антимикробному препарату, а к 6 генерации (20–22 сутки) устойчивость к данному антимикробному препарату полностью сформирована (рисунок 16).

Рис. 16. Формирование адаптационной бактериальной резистентности в группе 1

2. По результатам проведенного исследования в группе 2 (антисептик наружного действия) мы наблюдаем незначительный и медленный рост формирования устойчивости Staphylococcus aureus с 3 генерации (как и в предыдущей группе), но уже начиная с 4 генерации потомства, это 4 бутылочка (14–16 сутки) отмечается скачкообразный и бурный рост устойчивости бактерии к антисептическому средству. К 6 генерации (20–22 сутки) возбудителя, как и в предыдущей группе, устойчивость полностью сформирована (рисунок 17).

Рис. 17. Формирование адаптационной бактериальной резистентности в группе 2

3. При проведении сравнительных исследований обеих групп мы наблюдаем в 100 % случаев формирование устойчивости к 6 генерации (6 бутылочка). Однако, в первой группе формируется поздняя устойчивость к антимикробному препарату (цефтриаксон) — 6-ая генерация потомства, а во второй группе (антисептик наружного действия «Sanitelle») — ранняя устойчивость , уже на 4 генерация потомства бактерий (рисунок 18).

Рис. 18. Сравнение адаптационной резистентности в обеих клинических группах

4. С целью подтверждения сформированной адаптационной резистентности микроорганизм Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк) от 8 генерации бактерий (8 бутылочка) первой клинической группы (цефтриаксон) высеян на чашку Петри с желточно-солевым агаром, в которую помещен диск, пропитанный антимикробным препаратом (цефтриаксон). После культивации микроорганизма мы наблюдаем, полное отсутствие чувствительности Staphylococcus aureus (золотистого стафилококка) к антимикробному препарату (цефтриаксон), что подтверждается ростом микроорганизма по всей чашке и диск с антибиотиком не убивает микроб (Рисунок 19)

Рис. 19. Рост микроорганизма по всей чашке и неэффективность диска с антибиотиком

В отличие от 1 бутылочки (первая генерация бактерий), когда чувствительность к антимикробному препарату сохранена на 100 %, что наблюдается визуально по свободному пространству вокруг диска (микроб уничтожен) (рисунок 20).

Рис. 20. Полная чувствительность микроорганизма к антибактериальному препарату

5. С целью определения вероятных путей формирования адаптационной устойчивости, выделенная культура микроорганизма Staphylococcus aureus (золотистого стафилококка) от 8 генерации потомства (8 бутылочка) была открашена по грамму с последующей световой микроскопией препарата. По данным микроскопии мы наблюдаем полную дезорганизацию расположения микробных клеток. Клетки лежат обособленно и не имеют четкой организации в виде «гроздей винограда» (рисунок 21).

Рис. 21. Хаотичное расположение возбудителя при микроскопии от 8 генерации бактерии	Рис. 22. Структурированное расположения Staphylococcus aureus (золотистого стафилококка) от 1 генерации бактерии

В отличие от первых микроскопий, где Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк) имеет четкую структурированность и располагается в виде «гроздей винограда» (рисунок 22).

Обсуждение полученных результатов

На основании полученных результатов по изучению формирования адаптивной резистентности Staphylococcus aureus (золотистого стафилококка) под влиянием неблагоприятных условий внешней среды можно отметить: в первой группе исследования (прием антибактериального препарата) отмечается формирование поздней адаптивной устойчивости к 6 генерации потомства (20–22 сутки), а в группе применения наружного антисептика — ранняя устойчивость бактерий уже формируется уже к 4 генерации возбудителя (14–16 сутки).

Стоит также отметить, что к восьмой генерации бактериальных клеток (28 сутки) бактериальная адаптивная устойчивость (резистентность) уже полностью сформирована в обеих клинических группах в 100 % случаев.

Формирование более ранней резистентности на применение наружного антисептика, по всей видимости связано с механизмом формирования наружной капсулы у бактерий, что подтверждается дезорганизацией характерного расположения возбудителя (отсутствие характерных «гроздей винограда»). Капсула мешает типичному расположению бактерий и вследствие этого, теряется их структурированность в виде «гроздей винограда». Формирование поздней резистентности, вероятнее всего, связано с продукцией специфических ферментов, что подтверждается удлинёнными временными рамками, необходимыми на синтез (производство) этого фермента.

Заключение

1. Несмотря на различные временные рамки формирования адаптивной резистентности, устойчивость микроорганизмов к различным факторам неблагоприятной среды (антисептики и антимикробные препараты) наступает в 100 % случаев.
2. Формирование бактериальной устойчивости при применении антимикробного препарата (цефтриаксон) формируется к 20–22 суткам, а наружного антисептика («Sanitelle») к 14 суткам.
3. Формирование ранней устойчивости (14 сутки), по всей видимости обусловлено формированием капсулы, которая защищает микробную клетку от агрессивных условий внешней среды, что подтверждается нарушением специфического расположения микроорганизмов в виде «гроздей винограда».
4. Формирование поздней устойчивости (к 22 суткам), можно объяснить выработкой специфического фермента, который ответственен за разрушение антимикробного препарата. Удлинение сроков формирование устойчивости, по всей видимости, можно объяснить длительным периодом синтеза этого фермента.

Выводы

1. Длительный прием антимикробных препаратов сопровождается развитием адаптационной резистентности бактерий, поэтому должен быть непродолжительным и курсовым.
2. Применение наружных антисептических средств должно быть ограниченным и носить кратковременный характер. После применения в общественных местах необходимо смывать антисептик с кожных покровов.
3. Назначение и применение антимикробных препаратов, антисептиков и других средств медицинского назначения должно происходить только после консультации специалистов (врача) во избежание нежелательных реакций и осложнений.

Литература:

1. Беляев Д. К. //Биология 10–11 класс. Общая биология. Базовый уровень//. — 11-е издание, стереотипное. — М.: Просвещение, 2012. — 304
2. Захаров В. Б., Мамонтов С. Г., Сонин Н. И. //Биология 11 класс. Общая биология. Профильный уровень//. — 5-е издание, стереотипное. — М.: Дрофа, 2010. — 388 с.
3. Сивоглазов В. И., Агафонова И. Б., Захарова Е. Т. //Биология 10–11 класс. Общая биология. Базовый уровень//. — 6-е издание, дополненное. — М.: Дрофа, 2010. — 384 с.
4. Дарвин Ч. Происхождение видов путем естественного отбора: Кн. Для учителя/Коммент. Яблокова А. В., Медникова Б. М. — Москва: Просвещение, 1986 г. — 383с. (стр.100, 312–314)
5. Воронцов Н. Н. Теория эволюции: истоки, постулаты и проблемы. — М.: «Знание», 1984 г. — 64 с.
6. Урманцев Ю. А. Природа адаптации (системная экспликация)// «Вопросы философии». — 1998. — № 12.
7. Лопатина А. Б. Теоретические основы адаптации и механизмов ее обеспечения // Научное обозрение. Медицинские науки. — 2016. — № 5. — С. 63–71;
8. Агаджанян Н. А., Труханов А. И., Шендеров Б. А. Этюды об адаптации и путях сохранения здоровья. — М.: изд-во «Сирин», — 2002. — 156 с.
9. Быков Е. В., Ефимова Н. В. Адаптация биологических систем к естественным и экстремальным факторам среды //Издательство Южно-Уральского государственного гуманитарно-педагогического университета, 2016 г.
10. Осколок Л. Н., Порядин Г. В. Основные механизмы повреждения клеток//учебное пособие для самостоятельной работы студентов медицинских вузов. // ФГБОУ ВО РНИМУ имени Н. И. Пирогова Минздрава России, Москва, Издательство, 2016 г., 55 с.
11. Кузьмина, В. Е. Основы адаптологии // учебное пособие — 2-е изд. — Самара: Изд-во «Самарский университет», 2013. — 236 с.
12. Срослова Г. А., Постнова М. В., Зимина Ю. А. Особенности адаптации живых организмов//Вестник ВолГУ. Серия 11, Естественные науки. 2017. Т. 7. № 4, с 32–38
13. Сапов И. А., Новиков В. С. Неспецифические механизмы адаптации человека // Л.: Наука, 2004. — 146 с
14. Хакимова Д. М. Введение в патологию. Повреждение клеток и тканей. Процессы адаптации. Учебное пособие — Казань: Казан. ун-т, 2021. — 46 с.
15. Литвицкий П. Ф., Патофизиология. В 2 т. Т.1: учебник//5-е изд., перераб. и доп. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2015.
16. Новицкий В. В., Патофизиология. В 2-х томах. Том 1 / Под ред. В. В. Новицкого, Е. Д. Гольдберга, О. И. Уразовой — 4-е изд., перераб. и доп. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2013.
17. Мусыргалина Ф. Ф., Викторова Т. В., Лукманова Г. И. Структурная организация эукариотической клетки//учебное пособие– Уфа: Изд-во ГБОУ ВПО БГМУ Минздрава России, 2013. -83 с.
18. Карпеева Е. А., Ильина Н. А., Недошивина С. В. Цитология// Учебное пособие-Ульяновск «Ульяновский Государственный Педагогический Университет» 2012 г.
19. Пушилина А. Д., Коменкова Т. С., Зайцева Е. А. Современные представления о механизмах формирования резистентности микроорганизмов к антимикробным препаратам//«Медико-фармацевтический журнал «Пульс»- 2019. Том. 21. N 10
20. Гненная Н. В., Сазыкин И. С., Сазыкина М. А. Механизмы приобретения микроорганизмами резистентности к антибиотикам // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова. 2018. Т. 14. №. 1. С. 77.
21. Онищенко Г. Г. Национальная система химической и биологической безопасности в Российской Федерации 2009–2013 гг. Утв. Распоряжение Правительства РФ № 74-р от 20 %01.2008.
22. Пальцев М. А., Иванов А. А. Биологическая безопасность// — М.: Медицина, 2006. — 304 с.
23. Воробьев А. А., Кривошеин Ю. С., Щиробоков В. П. Медицинская и санитарная микробиология //Медицинская академия, 2009. — 464 с.
24. ECDC (2017), Antimicrobial resistance surveillance in Europe 2015. Annual Report of the European Antimicrobial Resistance Surveillance Network(EARSNet), https://ecdc.europa.eu/sites/portal/files/media/en/publications/Publications/antimicrobial-resistance-europe-2015.pdf.
25. Vidal D., Puig L., Gilaberte M., et all. Review of 26 cases of classical pyoderma gangrenosum: clinical and therapeutic features,” Journal of Dermatological Treatment, vol. 15, no. 3, pp. 146–152, 2004.View:at Publisher Site | Google Scholar
26. Supotnitskiy M.V Mechanisms of Antibiotic Resistance in Bacteria // Biopreparaty. 2011. №. 2. P. 4–11.
27. Namazova-Baranova L. S., Baranov A. A. Antibiotic Resistance in Modern World // Pediatricheskaya farmakologiya. 2017. T. 14. №. 5. P. 341- 354.